So zavedením moderných technológií v medicíne rastú možnosti imunochemických diagnostických metód, ktoré sú schopné rýchlo a presne rozpoznať ochorenie, keď sú iné metódy bezmocné. Pochopenie, že vírus hepatitídy B je schopný byť v tele vo veľmi nízkej koncentrácii, pri ktorej sa nedá detegovať ani takou spoľahlivou metódou, ako je PCR, si vyžaduje, aby sa znovu pozrel na problém diagnostiky tohto ochorenia a na zhodnotenie možností imunotestu.
V tomto materiáli budeme podrobne analyzovať všetko, čo sa týka tohto typu laboratórneho výskumu. Dozviete sa, čo je enzýmový imunotest a ako sa vykonáva, čo je austrálsky antigén a ako sa určuje, čo sú nezrozumiteľné skratky Hbs ag.
Obsah článku:
Všeobecné informácie o ELISA
ELISA (skrátená ELISA) je laboratórna diagnostická metóda, ktorá dokáže detegovať antigény aj protilátky zo širokej škály infekcií, vrátane hepatitídy B. Súčasná znalosť vlastností vírusu a charakteristík imunitnej odpovede organizmu umožňuje nielen detekciu infekcie, ale aj jej identifikáciu. účinnosti očkovania a vyhodnotiť účinnosť liečby.
Podstata enzýmového imunotestu
ELISA je založená na reakcii „antigén-protilátka“ alebo skôr na jej vlastnostiach.
V reakcii na inváziu cudzej látky (antigénu), ktorá je najmä proteínmi vírusu, produkuje telo proteíny proteíny - protilátky. Protilátky vstupujú do komplexnej reakcie s antigénom, čo blokuje jeho aktivitu.
Nižšie budeme hovoriť o antigénoch a protilátkach, ale teraz si všimneme, že pre každý antigén sú prísne individuálne alebo ako hovoria lekári homologické protilátky. Ak teda chceme detekovať špecifický antigén v krvi, použijeme diagnostickú tabletu s protilátkami. Ak je v krvi antigén, bude reagovať s protilátkami, ktoré môžu byť detegované rôznymi spôsobmi. A naopak. Ak chceme nájsť nejaké protilátky, potom potrebujeme tabletu s príslušným antigénom.
Diagnostická hodnota medveďov je najčastejšie iba protilátok, s ktorými môžete diagnostikovať takmer akúkoľvek infekciu. Zvláštnosťou vírusu hepatitídy B je však to, že hlavnú úlohu v diagnostike hrá jeden z antigénov - austrálsky antigén.
Ako je IFA
Zvážte typický postup ELISA pre konkrétny príklad, ak chcete identifikovať protilátky proti patogénu.
Na diagnostiku sa použije tableta s 96 jamkami, ktoré sú vopred nasýtené zodpovedajúcim antigénom. Ďalej je postup nasledovný:
sérum sa aplikuje na všetky bunky;
homológne protilátky reagujú s antigénom a viažu sa na platňu;
tablety sa premyjú, odstránia sa nepripojené protilátky;
potom sa do buniek zavedie enzymatická značka - látka, ktorá reaguje s protilátkami a spôsobuje farbenie obsahu bunky.
Toto je štandardný postup ELISA s farbením, ktorý sa používa napríklad v imunochromatografických testovacích prúžkoch.
ELISA sa neobmedzuje na kvalitatívne stanovenie protilátok alebo antigénov patogénu. Čím viac protilátok je obsiahnutých v bunkách tablety, tým intenzívnejší je zafarbený roztok. Pri porovnaní jeho optickej hustoty s kontrolou, moderné zariadenie môže celkom presne vypočítať koncentráciu protilátok na jednotku objemu. Uskutočňuje sa teda kvantitatívna ELISA, miera merania, pri ktorej sú najčastejšie jednotky optickej hustoty (EOP).
Imunochemiluminiscenčná analýza
V súčasnosti existuje niekoľko desiatok typov ELISA, z ktorých každá má preferovaný rozsah. Najobľúbenejšou v diagnostike hepatitídy B je imunochemiluminiscenčná analýza.
Enzymatická značka pre túto analýzu nie je chromatín, ako v štandardnej ELISA, ale špeciálne látky - fosfory, ktoré spôsobujú, že komplex svieti v ultrafialovom svetle.
Pomocou špeciálneho zariadenia - luminometra môžete presne určiť úroveň emisií av dôsledku toho aj koncentráciu požadovanej látky.
Použitím metód ELISA stanovte takmer všetky existujúce antigény vírusu hepatitídy B a protilátky proti nim.
Antigény vírusu hepatitídy B: Hbs, Hbe a Hbc
Termín antigén (antigén) pochádza z dvoch anglických slov: protilátka - protilátka a generátor - výrobca. Pod antigénom teda rozumieme akúkoľvek látku, ktorá jej spôsobuje tvorbu protilátok v tele. Najbežnejšími antigénmi sú proteínové zlúčeniny.
Dnes sú známe tri antigény vírusu hepatitídy B: hbsag, hbc a hbe.
Austrálsky antigén
Proteín, ktorý je súčasťou vonkajšieho obalu patogénovej hepatitídy B, bol detegovaný dlho pred objavením samotného vírusu. Tento antigén dostal svoj názov, pretože bol prvýkrát identifikovaný z domorodých obyvateľov Austrálie. Prvé však proteín nebol považovaný za antigén, ale úplne prirodzený prvok krvi medzi domorodcami a uvedomenie si jeho spojenia s ochoreniami pečene o niečo neskôr.
Dlhodobé uchovávanie antigénu v krvi a neprítomnosť protilátok poukazuje na možnosť tvorby chronickej hepatitídy B pozitívnej na HBeAg.
V odbornej literatúre sa v súčasnosti názov „austrálsky antigén“ prakticky nenašiel a bol nahradený medzinárodnou skratkou - HbsAg (povrchový antigén hepatitídy b - povrchový antigén hepatitídy B). Okrem toho môžete nájsť skratky hbs antigén alebo len hbs. Ktorákoľvek z týchto skratiek je prijateľná a môže byť doplnená záznamom HBV alebo HBV - vírusu hepatitídy B (vírus hepatitídy b).
Povrchový antigén vírusu hepatitídy B má jednu pozoruhodnú vlastnosť, ktorá z neho robí nepostrádateľný diagnostický marker - jeho koncentrácia v krvi môže dosiahnuť veľmi vysoké hladiny až do polovice miligramu na mililiter krvi. Je to preto, že len malá časť nových HBsAg, ktoré sa tvoria počas reprodukcie vírusu hepatitídy B, ide do konštrukcie membrán nových vírusových častíc a zvyšok - voľne cirkuluje v krvi. Výsledkom je, že počet častíc hbs v krvi môže prekročiť počet viriónov stovky tisíckrát.
Táto vlastnosť robí z austrálskeho antigénu hlavný marker pri skríningu diagnózy hepatitídy B, ktorá sa nachádza v krvi už 4-6 týždňov po infekcii. Ako protilátky tvoria povrchový antigén postupne nahradený. Ak HBsAg pretrváva aj po 6 mesiacoch, znamená to prechod infekcie na chronickú formu.
V poslednej dobe, keď bolo možné určiť koncentráciu hbs hbv, jeho úloha v diagnóze ešte vzrástla, pretože spoliehanie sa na hladinu antigénu môže rozlíšiť chronickú hepatitídu B (HBV) od zdravého stavu nositeľa, ako aj monitorovať účinnosť liečby.
Core antigény
V jadre vírusu - nukleokapsid - sú proteíny, ktoré riadia reprodukciu vírusu HBcoreAg a HBeAg.
HBcoreAg, ktorý sa môže tiež nazývať HBCore-antigén, hbc alebo jadrový antigén, možno nájsť len v tkanivách pečene, priamo v jadrách hepatocytov. Tento antigén nie je detegovaný v krvi a nemá diagnostickú hodnotu.
Štruktúra vírusu hepatitídy
HBeAg (HBe, HBprecoreAg) - naopak, hrá dôležitú úlohu v diagnostike. HBeAg a HBcoreAg sú blízki príbuzní. Majú veľkú podobnosť štruktúry a líšia sa hlavne v priestorovej polohe molekúl. Na rozdiel od HBcore HBe nie je súčasťou nukleokapsidovej steny a voľne cirkuluje v krvi.
Úloha HBe v infekčnom procese ešte nie je dostatočne jasná, avšak zvláštnosti jej správania a ich vzťah s priebehom infekčného procesu už boli dostatočne preskúmané. HBeAg indikuje aktívnu reprodukciu vírusu a umožňuje spoľahlivo určiť fázu chronickej CHB - HBeAg-pozitívnej alebo HBeAg-negatívnej.
HBe je možné detegovať v krvi už v inkubačnej dobe akútneho vírusu hepatitídy B (HBV), zatiaľ čo vysoká koncentrácia HBeAg po dobu 3 týždňov s najväčšou pravdepodobnosťou indikuje hrozbu chronického procesu. Koncentrácia HBe priamo súvisí s obsahom častíc Dane (tzv. Častice vírusu hepatitídy B) - čím vyššie množstvo HBe, tým vyššia je koncentrácia HBV DNA v krvi.
HBeAg je hlavným markerom infekčnosti ochorenia. Krv HBeAg-pozitívnych pacientov je oveľa nákazlivejšia ako HBeAg-negatívna. Napríklad u tehotných žien pozitívnych na HBe a Hbs pravdepodobnosť prenosu infekcie na dieťa dosahuje 50%, zatiaľ čo pravdepodobnosť takejto udalosti u HBe-negatívnych, ale Hb pozitívnych matiek je 10-30%.
Hbe určuje priebeh chronickej hepatitídy. HBeAg-pozitívna chronická hepatitída B má oveľa nepriaznivejšiu prognózu z hľadiska vývoja cirhózy.
To je pravdepodobne všetko, čo potrebujete vedieť o HBV antigénoch a prejdeme na druhú skupinu markerov hepatitídy B - protilátky.
Esencia a diagnostika hepatitídy B
Hneď ako sa štádium zmení na žltačku, začnú žltačky a sliznice žltať, zdravotný stav sa prudko zhoršuje. Je dôležité zdôrazniť, že pečeň rastie vo veľkosti a vystupuje zospodu pod klenbou. Farbenie kože v žltom odtieni prebieha postupne. Množstvo pečeňových enzýmov rastie v krvi a vzorka tymolu sa nemení.
Diagnostika ochorenia: základné metódy a koncepty
Diagnóza hepatitídy B sa vykonáva niekoľkými spôsobmi:
1. Ak chcete začať, musí lekár vziať anamnézu a vykonať dôkladný prieskum osoby. Počas prieskumu sa kladie veľký dôraz na tieto momenty:
- či zavedenie liekov alebo iných prostriedkov intravenóznej liečby;
- či boli krvné transfúzie;
- či boli vykonané chirurgické zákroky;
- či bolo prítomné poškodenie integrity kože;
- aké sú sexuálne vzťahy;
- či pacient mal kontakt s pacientom s hepatitídou B alebo jej nosičom.
Ak sa vyskytla niektorá z týchto položiek, potom sa zadáva ako dlho. Typicky sa infekcia vyskytuje pri kontakte od 6 týždňov do šiestich mesiacov pred výskytom prvých príznakov hepatitídy.
2. Laboratórna diagnostika hepatitídy B, ELISA analýza krvi na antigény a protilátky proti hepatitíde B. Tento typ vyšetrenia je zameraný na identifikáciu 3 antigénov:
- HBsAg (antigén, umiestnený povrchovo),
- HBcAg (umiestnené vnútri)
- HBeAg (prepojené s predchádzajúcim antigénom). Ochorenie je charakterizované včasnou detekciou týchto antigénov v krvi.
Ľudia trpiaci hepatitídou B a obsahujúci tieto antigény v krvi sú veľmi nákazlivé. Sú schopní infikovať iných ľudí. Ak HBsAg chýba v ľudskej krvi, znamená to, že je zdravý. Ak je človek chorý, potom telo začne vylučovať protilátky na existujúce antigény.
3. Diagnostika hepatitídy B pomocou PCR techniky určenej na detekciu HBV DNA v obehovom systéme. Ak je výsledok pozitívny, potom má osoba hepatitídu. Analýza DNA HBV sa nazýva kvalitatívna. Existuje aj kvantitatívna PCR. Kvantitatívna PCR poskytuje príležitosť na identifikáciu záťaže s prítomnosťou vírusu hepatitídy. Čo je vírusová záťaž? Toto je počet kópií HBV DNA v 1 ml krvi. Kvantitatívna analýza hepatitídy ukazuje aktivitu vírusu.
4. Krvný test pre biochémiu. Táto analýza zahŕňa stanovenie počtu enzýmov produkovaných pečeňou. Takéto enzýmy zahŕňajú ALT, AST. Sú umiestnené vo vnútri pečeňových buniek - hepatocytov. Ak sú poškodené pečeňové bunky, enzýmy sa uvoľňujú a vstupujú do krvi. Pozitívna analýza sa zvažuje len vtedy, ak počet pečeňových enzýmov prevyšuje normu. Prieskum ukazuje, či existujú zápalové procesy v pečeni a ich aktivita.
5. Ultrazvukové vyšetrenie, elastometria atď. Diagnóza hepatitídy sa môže vykonávať aj bez laboratórnych metód. Použitie ultrazvuku vyšetruje brušné orgány. Ultrazvuk poskytuje jasný obraz o akomkoľvek zápalovom procese pečene a jej ciev. Efektívne vedenie elastometrie pečene. Metóda elastometrie poskytuje predstavu o stupni fibrózy v tkanive pečene.
6. Najdôležitejšou analýzou je prítomnosť antigénov hepatitídy B v bunke červených krviniek, čo indikuje prítomnosť infekcie v ľudskom tele.
7. Laboratórny typ diagnózy hepatitídy zahŕňa stanovenie antigénov a protilátok v hmotnosti erytrocytov. Najčastejšie sa HBsAg prejavuje v obehovom systéme aj v inkubačnej dobe hepatitídy. Človek nevie o vývoji svojej choroby a v krvi už prebiehajú zmeny. Ak je hepatitída akútna, HBsAg zmizne z krvi. Obvykle HBsAg nie je prítomný počas prvého mesiaca ikterického obdobia a protilátky proti tomuto antigénu začínajú figurovať v obehovom systéme 90 dní po infekcii.
Pozitívny test na protilátky neznamená, že osoba má hepatitídu. Je možné, že predtým trpel hepatitídou bez D-látky. Ak po liečbe nie je v krvi pacienta HBsAg, ale existujú protilátky, znamená to dobrú prognózu, ktorá naznačuje, že pacient sa zotavuje. Ak má pacient chronickú alebo závažnú hepatitídu, protilátky sa môžu objaviť už od prvých dní ikterického obdobia.
Spoľahlivým ekvivalentom je anti-HBc IgM v krvi. Odhaľujú sa na konci predikčného obdobia. Sú prítomné celé obdobie zjavných prejavov. Ak analýza obsahuje anti-HBc IgM, znamená to, že vírus sa naďalej množí. Po nástupe uzdravenia zmizne anti-HBc IgM. Akútna fáza ochorenia môže produkovať anti-HBc IgG test. Budú zistené počas života človeka.
Keď sa dokončí doba inkubácie hepatitídy (najmä autoimunitnej), HBeAg sa začne objavovať v krvi. Informujú o aktívnom delení a náraste infekčných častíc. Akonáhle začne ikterické obdobie, NVAAg zmizne. Je nahradený anti-HBe. Anti-HBe ukazuje, že aktivita infekcie je znížená a čoskoro príde zotavenie. Ale rozmnožovanie vírusu sa nezastaví!
Akútna hepatitída sa môže zmeniť na chronickú. O tomto bude hovoriť identifikované v krvi HВеАg. Ak je prítomný, znamená to, že pravdepodobnosť transformácie procesu na chronickú formu je vysoká. Prítomnosť HeVag označuje vysoko nákazlivého pacienta.
Je potrebné pripomenúť, že laboratórna diagnostika hepatitídy B, ktorá má negatívny výsledok pre HBsAg, nevylučuje samotnú diagnózu. Dôležitým kľúčovým prvkom je prítomnosť anti-HBc IgM v krvi. Tieto protilátky s presnosťou potvrdia ochorenie. Ak krvný test neobsahuje anti-HBc IgM, môže to indikovať prítomnosť HBV a prítomnosť týchto protilátok indikuje zosilnenie infekcie.
Detekcia DNA hepatitídy B
Najdôležitejšou štúdiou na stanovenie prítomnosti vírusovej DNA je PCR. Analýza ukazuje aktivitu infekčného procesu. Pomocou tejto metódy sa môžete dozvedieť o prognóze ochorenia.
Ak je hepatitída priaznivejšia, potom HBV DNA zmizne z krvi počas počiatočných období infekcie. Laboratórna diagnostika vo forme PCR poskytuje údaje o kvalite liečby (robí účinok konkrétneho lieku).
Aby sme pochopili, aká taktika by sa mala prijať pri vymenovaní terapeutických opatrení, je potrebné vykonať kvantitatívnu metódu PCR. Kvantitatívna PCR poskytuje dôkaz pozitívnej reakcie z terapie.
Základ pre diagnostiku
Na vykonanie vhodnej diagnózy budú potrebné nasledujúce vyšetrenia:
- Denná prehliadka, hmatové vyšetrenie.
- Ultrazvuk pečene.
- Biochemická analýza krvi (vykonávaná opakovane).
- Vyšetrenie na HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc IgM, anti-HBc, HBV DNA.
- Markery HBV a HCV (vírusová hepatitída sú vylúčené).
- Punkcia pečene.
- Biopsia pečene. Pomocou špeciálnej ihly sa brušná stena prepichne a malý kúsok pečene sa odstráni na histologické vyšetrenie (kus má veľkosť nie viac ako pol gramu). Biopsia je najnovšia metóda testovania hepatitídy. Vďaka nej môžete najpresnejšie hovoriť o stupni aktivity infekčného procesu, fibróze pečene. Biopsia je chirurgický zákrok. To môže viesť k komplikáciám, takže sa často nepoužíva na diagnostiku.
- Fibroelastografiya. Môže sa použiť na odhad hustoty tkaniva pečene. Táto technika je podobná ultrazvuku. Štúdia využíva špeciálny senzor, ktorý je inštalovaný na kožu v mieste projekcie pečene.
- FibroTest. Je založený na počítaní určitých krvných obrazov.
Chronická hepatitída B
Chronická hepatitída B pokračuje vo fáze:
Fáza 1 - Replikácia vírusu. Vírus sa znásobuje so zvýšenou aktivitou.
Fáza 2 - integrácia. Vírus prestane množiť. Vírusový genóm sa začína integrovať do DNA normálnych pečeňových buniek, hepatocytov.
Na určenie rýchlosti progresie vírusu je dôležité pochopiť závažnosť procesu, výsledok, stupeň narušenia pečeňových buniek. Laboratórna diagnostika chronickej hepatitídy je založená na zistení:
Ak je hepatitída HBeAg-pozitívna (pozitívna analýza), potom v hmotnosti erytrocytov bude:
- v štádiu rozmnožovania - HBsAg, HBeAg, anti-HBc IgM, anti-HBc (celkovo), HBV DNA;
- v štádiu inzercie hepatocytov do DNA - HBsAg, anti-HBe, anti-HBc (celkom), HBV DNA.
Ak je hepatitída séronegatívna, potom sa v krvi nachádza HBsAg, anti-HBe, anti-HBc IgM, anti-HBc, HBV DNA. Okrem toho ich prítomnosť v žiadnom prípade nezávisí od štádia infekčného procesu.
Diferenciálna diagnostika
Pri diagnóze je lekár povinný rozlišovať hepatitídu B s inými ochoreniami - hepatitídou A, C, E, D. Konečná diagnóza môže byť urobená až po identifikácii určitých markerov špecifických pre každú z buniek hepatitídy v krvi.
Hepatitída by mala byť diferencovaná s ďalšími dôležitými chorobami: akútnymi respiračnými vírusovými infekciami, žlčovými kameňmi, otravou jedlom, črevnou infekciou, chirurgickou patológiou brušných orgánov a mnohými ďalšími chorobami.
Autoimunitná hepatitída
Pri autoimunitnej hepatitíde zahŕňa diagnóza nasledujúce najdôležitejšie vyšetrenia:
- Analýza hmotnosti červených krviniek (OAK). Vysvetlenie: anémia (normocytová) v krvi sa pozoruje pri autoimunitnej hepatitíde, zníženom obsahu leukocytov, krvných doštičiek a zvýšenej ROE. Možno však očakávať vyšší stupeň anémie.
- Moč. Rozlúštenie analýzy moču: obsahuje bielkoviny, červené krvinky, bilirubín.
- Krvný test pre biochémiu. Veľmi relevantná analýza. Interpretácia: zvýšené množstvo bilirubínu, zvýšená argináza, pokles albumínu, zvýšenie γ-globulínov a test tymolu. Sublimačný test sa zníži. Niektoré indikátory je možné zvýšiť dvakrát alebo viackrát. Toto je pozitívny test na autoimunitnú hepatitídu.
- Imunologická analýza. Dekódovanie: T-lymfocytové supresory sa znižujú, lupusové bunky sa objavujú v hmotnosti erytrocytov, zvyšuje sa počet imunoglobulínov, protilátky proti erytrocytom.
Pozitívny test na hepatitídu možno zistiť pomocou sérologickej metódy výskumu. Autoimunitná hepatitída je heterogénne ochorenie.
ELISA na vírusovú hepatitídu
9. marec 2017, 16:25 Odborné články: Nová Vladislavovna Izvochkova 0 3,608
Na detekciu vírusovej hepatitídy v tele liek široko využíva enzýmový imunotest na základe zistenia koncentrácie a typu antigénov pomocou protilátok a enzýmov. Vykonáva sa postupne, laboratórnym výskumom, s vysokou presnosťou indikácií. V závislosti od množstva a triedy protilátok, farba a koncentrácia enzýmu, ktorý používa test ELISA, a teda aj lekár diagnostikujú ochorenie, zmeny.
Čo je ELISA?
Prítomnosť vírusovej hepatitídy v tele pacienta sa stanoví sérologickou metódou analýzy krvi na prítomnosť vírusu HCV a markerov (tiel a protilátok), ktoré ho označujú. Enzymovo viazaný imunosorbentný test (ELISA) skúma rôzne vírusy, zlúčeniny s nízkou molekulovou hmotnosťou, makromolekuly, ich kvalitatívne a kvantitatívne ukazovatele, s použitím prejavu reakcie na ich antigény. Na tento účel použite enzým ako značku na registráciu signálu. Čoraz viac sa používa v medicíne, pretože ELISA jasne zistí, že dobre definované antigény, bez toho, aby ich zamieňali s inými, majú vysokú citlivosť na prítomnosť invázie do vírusovej hepatitídy.
Nevýhodou takejto diagnózy je neschopnosť identifikovať príčinu ochorenia, pretože táto metóda len indikuje reakciu imunitného systému organizmu. Výsledky analýzy sú ovplyvnené očkovaním vykonaným skôr. 8 hodín pred analýzou sa odporúča zdržať sa jedla, nikotínu a alkoholu. Základom testu ELISA je enzymatická a imunitná reakcia organizmu na vírus. Biologické molekuly sa viažu na bunku a jej elementy, mikroorganizmy, detekujú vírus, potom pracujú enzýmy, ktoré vám umožňujú vyjadriť imunitnú reakciu viditeľným a merateľným parametrom.
Indikácie pre analýzu
Vírusová hepatitída v tele môže spôsobiť rakovinu a cirhózu pečene. Dôležitosť včasnej diagnózy je nesporná. Primárnou metódou diagnostiky je test ELISA, ktorý s vysokou presnosťou určuje prítomnosť HCV vírusu (IgM a IgG) a aktivity jeho stopových prvkov. Povinné testy na vírusovú hepatitídu prejdú:
- Ľudia s rizikovými skupinami (narkomani, ľudia s AIDS, zamestnanci zdravotníckych a orgánov činných v trestnom konaní).
- Ľudia s akútnou alebo chronickou hepatitídou.
- Tehotné a plánovanie tehotenstva ženy.
ELISA rozpoznáva chorobu v akomkoľvek štádiu. Výsledky analýzy sú v priemere pripravené za 2 dni.
Kritériá, ktoré určujú dôležitosť analýzy
Test ELISA určuje prítomnosť protilátok triedy IgG, IgM, IgA. Pri diagnostike vírusovej hepatitídy lekár nevenuje pozornosť ich typu, pretože prítomnosť akéhokoľvek takéhoto prejavu vírusu HCV už indikuje akútne alebo chronické štádium ochorenia. V počiatočných štádiách ochorenia sa hladina IgM zvyšuje (5 dní po infekcii); 15. - 20. deň sa objavia IgG protilátky a môžu zostať v ľudskej krvi po dlhom čase aj po vyliečení; IgA - objaví sa po 10-14 dňoch, po liečbe klesá.
Ak sú IgG a IgA zistené po použití liekov a ich hladina zostáva rovnaká - nosič má chronickú formu hepatitídy. Dôležitým kritériom testu bude jasné vymedzenie triedy dostupných protilátok a ich množstvo. Na základe toho môžete vedieť nielen o prítomnosti choroby, ale aj o štádiu jej vývoja. Detekcia takýchto prvkov v krvi pacienta umožňuje predpísať správnu a včasnú liečbu, aby sa zabránilo vážnejším následkom.
Ako sa to robí?
Prideľte priamy a nie priamy test ELISA. Fázy priame:
- Zber biologického materiálu a jeho umiestnenie do špeciálnych dier.
- Počas 15-30 minút antigény sú pripojené na povrch jamiek.
- Pridanie protilátok do jamiek na nájdený antigén. Všetko sa nechalo 1-5 hodín.
- Odstráňte nepripojené antigény (vylejte obsah jamiek).
- Jamky opláchnite špeciálnym roztokom.
- Do jamiek sa pridá roztok enzýmu. Nechajte pôsobiť 30 minút - 1 hodinu.
- Použitie kolorimetrie (detekcia farby a koncentrácia farby obsahu jamky, porovnanie s indikátormi, ktoré sú priamo úmerné koncentrácii vírusu).
Nepriama metóda ELISA sa uskutočňuje s použitím neoznačených protilátok na nájdené antigény a následné pridanie značených protilátok. Najprv sa pacientovi odoberie krv a rozprestrie sa v jamkách počas 15-30 minút. (protilátky sú fixované otvormi). Potom sa do nich zavedú neznačené protilátky po dobu 1 - 5 hodín (vytvorí sa spojenie protilátok s antigénmi - imunitný komplex). Potom sa z jamiek nalejú nepripevnené mikroelementy a premyjú sa špeciálnym roztokom. V ďalšom štádiu laboratórny technik pridáva značené stopové prvky do jamiek počas 15-30 minút. (Toto sa viaže na neoznačenú značku s tvorbou komplexu "protilátka-protilátka-antigén"). Extra (voľné) sa počas odčerpávania a prania roztokom odstránia. Ďalej je enzým, ktorý mení farbu 5-30 minút. zostávajú v dierach a farebné údaje porovnané s údajmi tabuľkových ukazovateľov. Nepriama ELISA je presnejšia.
Čo ukazuje ELISA na vírusovú hepatitídu?
Imunoanalýza umožňuje zistiť prítomnosť infekcie (vírus hepatitídy všetkých druhov, HIV, herpes, syfilis, cytomegalovírus, osýpky, rubeola, vírus mumpsu, vírus Epstein-Barrovej), je markerom autoimunitných ochorení, rakovinových buniek. Označuje porušenie reprodukčných funkcií (zmeny testosterónu, prolaktínu, estradiolu a progesterónu), poruchy štítnej žľazy, zamorenie hlístami, chlamýdie. Účinný na detekciu ureaplazmózy, čierneho kašľa, vírusu Dange, vírusu West Nile, Borrelia. Zoznam definícií je vysoký, obsahuje mnoho položiek.
Potvrdenie výsledkov
Stanovenie antigénu HCV vírusu pomocou ELISA poskytuje 98% presnosť. Používa sa aj na retestovanie biologického materiálu s fuzzy predchádzajúcimi indikátormi. Prítomnosť antigénov IgM nie je indikátorom akútnej hepatitídy a vyžaduje si ďalší výskum. Keď sa test ELISA opakuje, výsledky sa zhodujú s 90 - 100%. V prípade minimálneho rozdielu sa priemerná hodnota berie ako ukazovateľ. Pre maximálnu presnosť z hľadiska lekárov odporúčame paralelne vykonávať biochemickú analýzu krvi. Na testovanie výsledkov po enzýmovom imunoanalýze môžete použiť iné diagnostické metódy.
Štúdie vírusu hepatitídy B (ELISA a PCR) t
Antigén „s“ vírusu hepatitídy B (HBsAg)
Povrchový antigén hepatitídy B v sére normálne chýba.
Detekcia povrchového antigénu hepatitídy B (HBsAg) v sére potvrdzuje akútnu alebo chronickú infekciu vírusom hepatitídy B.
Pri akútnom ochorení sa HBsAg deteguje v sére v posledných 1-2 týždňoch inkubačnej doby a prvých 2-3 týždňov klinického obdobia. Cirkulácia HBsAg v krvi môže byť obmedzená na niekoľko dní, preto by ste sa mali snažiť o skoré počiatočné vyšetrenie pacientov. Metóda ELISA umožňuje detekciu HBsAg u viac ako 90% pacientov. Takmer u 5% pacientov najcitlivejšie výskumné metódy nedetekujú HBsAg, v takýchto prípadoch je etiológia vírusovej hepatitídy B potvrdená prítomnosťou anti-HBcAg JgM alebo PCR.
Koncentrácia HBsAg v sére vo všetkých formách závažnosti hepatitídy B vo výške ochorenia má značný rozsah výkyvov, existuje však určitý model: v akútnom období existuje inverzný vzťah medzi koncentráciou séra HBsAg a závažnosťou ochorenia.
Vysoké koncentrácie HBsAg sú častejšie u miernych a stredne ťažkých foriem ochorenia. V ťažkých a malígnych formách je koncentrácia HBsAg v krvi často nízka a u 20% pacientov s ťažkou formou a v 30% s malígnym antigénom v krvi sa vôbec nedá zistiť. Vzhľad na tomto pozadí u pacientov s protilátkami proti HBsAg sa považuje za nepriaznivý diagnostický znak; je určený v malígnych formách hepatitídy B.
V akútnom priebehu hepatitídy B sa koncentrácia HBsAg v krvi postupne znižuje až do úplného vymiznutia tohto antigénu. HBsAg zmizne u väčšiny pacientov do 3 mesiacov od nástupu akútnej infekcie.
Zníženie koncentrácie HBsAg o viac ako 50% do konca tretieho týždňa akútneho obdobia spravidla indikuje ukončenie procesu infekcie. Zvyčajne u pacientov s vysokou koncentráciou HBsAg vo výške ochorenia, je detekovaný v krvi niekoľko mesiacov.
U pacientov s nízkymi koncentráciami HBsAg zmizne oveľa skôr (niekedy niekoľko dní po nástupe ochorenia). Všeobecne je čas detekcie HBsAg v rozsahu od niekoľkých dní do 4-5 mesiacov. Maximálna doba detekcie HBsAg s hladkým priebehom akútnej hepatitídy B nepresahuje 6 mesiacov od nástupu ochorenia.
HBsAg možno nájsť u zdravých ľudí, spravidla v profylaktických alebo náhodných štúdiách. V takýchto prípadoch sa skúmajú iné markery vírusovej hepatitídy B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti HBeAg a študuje sa funkcia pečene.
V prípade negatívnych výsledkov sú potrebné opakované štúdie na HBsAg.
Ak opakované krvné testy dlhšie ako 3 mesiace odhalia HBsAg, tento pacient je klasifikovaný ako chronický pacient s vírusovou hepatitídou B.
Prítomnosť HBsAg je pomerne bežná. Na svete je viac ako 300 miliónov prepravcov a v našej krajine je približne 10 miliónov prepravcov.
Ukončenie cirkulácie HBsAg s následnou sérokonverziou (tvorba anti-HBs) vždy indikuje regeneráciu tela.
Krvný test na prítomnosť HBsAg sa používa na nasledujúce účely:
- inkubačná doba;
- akútne ochorenie;
- skoré oživenie;
- pretrvávajúca chronická hepatitída;
- cirhóza pečene;
na identifikáciu pacientov v rizikových skupinách: t
Hodnotenie výsledkov výskumu
Výsledky štúdie sú vyjadrené kvalitatívne - pozitívne alebo negatívne. Negatívny výsledok indikuje neprítomnosť séra HBsAg. Pozitívny výsledok - identifikácia HBsAg indikuje inkubáciu alebo akútne obdobie akútnej vírusovej hepatitídy B, ako aj chronickej vírusovej hepatitídy B.
Protilátky proti jadrovému antigénu vírusu hepatitídy B JgG (anti-HBcAg JgG)
Normálne sérové anti-HBcAg chýba v sére.
U pacientov s anti-HBcAg sa JgG objavuje v akútnom období vírusovej hepatitídy B a pretrváva počas celého života. Anti-HBcAg JgG je vedúcim markerom prenesenej HBV.
Krvné testy na anti-HBcAg JgG sa používajú na diagnostiku:
Hodnotenie výsledkov výskumu
Výsledok štúdie je vyjadrený kvalitatívne - pozitívny alebo negatívny. Negatívny výsledok indikuje neprítomnosť sérového anti-HBcAg JgG. Pozitívny výsledok - identifikácia anti-HBcAg JgG indikuje akútnu infekciu, rekonvalescenciu alebo predtým prenesenú vírusovú hepatitídu B.
"E" antigén vírusu hepatitídy B (HBeAg)
Normálne HBeAg v sére chýba.
HBeAg sa nachádza v sére väčšiny pacientov s akútnou vírusovou hepatitídou B. Zvyčajne zmizne v krvi pred antigénom HBs. Vysoká hladina HBeAg v prvých týždňoch ochorenia alebo jeho detekcia viac ako 8 týždňov dáva dôvod na podozrenie z chronickej infekcie.
Tento antigén sa často deteguje pri chronickej aktívnej hepatitíde vírusovej etiológie. Zvláštny záujem v definícii HBeAg je skutočnosť, že jej detekcia charakterizuje aktívnu replikačnú fázu infekčného procesu. Bolo zistené, že vysoké koncentrácie HBeAg zodpovedajú vysokej aktivite DNA polymerázy a charakterizujú aktívnu replikáciu vírusu.
Prítomnosť HBeAg v krvi indikuje jeho vysokú infekčnosť, t.j. prítomnosť aktívnej infekcie hepatitídy B v tele, ktoré sa vyšetruje, a je detegovaná len v prítomnosti antigénu HBs v krvi. U pacientov s chronickou aktívnou hepatitídou sa antivírusové lieky používajú len vtedy, keď sa HBeAg zistí v krvi. HBeAg - antigén - marker akútnej fázy a replikácie vírusu hepatitídy B.
Krvný test na prítomnosť antigénu HBe sa používa na diagnostiku:
Hodnotenie výsledkov výskumu
Výsledok štúdie je vyjadrený kvalitatívne - pozitívny alebo negatívny. Negatívny výsledok indikuje neprítomnosť séra HBeAg. Pozitívny výsledok - detekcia HBeAg indikuje inkubáciu alebo akútne obdobie akútnej vírusovej hepatitídy B alebo pokračujúcu replikáciu vírusu a infekciu pacienta.
Protilátky proti antigénu "e" vírusu hepatitídy B (anti-HBeAg)
Anti-HBeAg v sére zvyčajne chýba. Vzhľad anti-HBeAg protilátok zvyčajne indikuje intenzívne odstránenie vírusu hepatitídy B a menšie infekcie pacienta z tela.
Tieto protilátky sa objavujú v akútnom období a pretrvávajú až 5 rokov po infekcii. Pri chronickej perzistujúcej hepatitíde sa anti-HBeAg nachádza v krvi pacienta spolu s HBsAg. Sérokonverzia, t.j. prechod HBeAg na anti-HBeAg, s chronickou aktívnou hepatitídou, častejšie prognosticky priaznivý, ale rovnaká sérokonverzia nezlepšuje prognózu závažnej cirhóznej transformácie pečene.
Krvné testy na prítomnosť anti-HBeAg sa používajú v nasledujúcich prípadoch v diagnostike vírusovej hepatitídy B:
Hodnotenie výsledkov výskumu
Výsledok štúdie je vyjadrený kvalitatívne - pozitívny alebo negatívny. Negatívny výsledok indikuje neprítomnosť protilátok proti HBeAg v sére. Pozitívnym výsledkom je detekcia protilátok proti HBeAg, čo môže indikovať počiatočné štádium akútnej vírusovej hepatitídy B, akútnej periódy infekcie, skorého štádia rekonvalescencie, rekonvalescencie, nedávno prenesenej vírusovej hepatitídy B alebo perzistujúcej vírusovej hepatitídy B.
Kritériami pre prítomnosť chronickej hepatitídy B sú:
Detekcia vírusu hepatitídy B pomocou PCR (kvalitatívne) t
Vírus hepatitídy B v krvi normálne chýba.
Kvalitatívne stanovenie vírusu hepatitídy B metódou PCR v krvi umožňuje potvrdiť prítomnosť vírusu v tele pacienta a tým stanoviť etiológiu ochorenia.
Táto štúdia poskytuje užitočné informácie pre diagnostiku akútnej vírusovej hepatitídy B v inkubácii a včasných vývojových štádiách ochorenia, keď chýbajú hlavné sérologické markery pacienta v krvi. Sérová vírusová DNA je detegovaná u 50% pacientov v neprítomnosti HBeAg. Analytická citlivosť metódy PCR nie je menšia ako 80 vírusových častíc v 5 μl, posledná detekčná vzorka DNA, špecificita - 98%.
Táto metóda je dôležitá pre diagnostiku a monitorovanie priebehu chronickej HBV. Približne 5-10% prípadov cirhózy a iných chronických ochorení pečene je spôsobených chronickým nosičom vírusu hepatitídy B. Markery aktivity takýchto ochorení sú prítomnosť HBeAg a DNA vírusu hepatitídy B v krvi.
Metóda PCR umožňuje stanoviť v krvi DNA vírusu hepatitídy B kvalitatívne aj kvantitatívne. Stanovený fragment v obidvoch prípadoch je jedinečná DNA sekvencia génu štruktúrneho proteínu vírusu hepatitídy B.
Detekcia DNA vírusu hepatitídy B v biomateriáli pomocou PCR je nevyhnutná pre:
Vymiznutie DNA hepatitídy B z krvi je známkou účinnosti liečby
Detekcia vírusu hepatitídy B pomocou PCR (kvantitatívne) t
Táto metóda poskytuje dôležité informácie o intenzite vývoja ochorenia, účinnosti liečby a vývoji rezistencie na aktívne liečivá.
Na diagnostiku vírusovej hepatitídy pomocou PCR v sére sa použijú testovacie systémy, ktorých citlivosť je 50-100 kópií vo vzorke, čo umožňuje detekciu vírusu v koncentrácii 5 x 103-3 -104 kópií / ml. PCR pri vírusovej hepatitíde B je určite nevyhnutná na posúdenie vírusovej replikácie.
Sérová vírusová DNA je detegovaná u 50% pacientov v neprítomnosti HBeAg. Ako materiál na detekciu DNA vírusu hepatitídy B môže slúžiť krvné sérum, lymfocyty a hepatobiopsia.
- Hodnotenie úrovne virémie je nasledovné:
- menej ako 2,10 ^ 5 kópií / ml (menej ako 2,10 ^ 5 IU / ml) - nízka virémia;
- od 2,10 ^ 5 kópií / ml (2,10 ^ 5 IU / ml) do 2,10 ^ 6 kópií / ml (8,10 ^ 5 IU / ml) - stredná virémia;
- viac ako 2,10 ^ 6 kópií / ml - vysoká virémia.
Existuje vzťah medzi výsledkom akútnej vírusovej hepatitídy B a koncentráciou DNA HBV v krvi pacienta. S nízkou hladinou virémie sa proces chronizácie infekcie blíži nule, s priemerom, proces je chronizovaný u 25-30% pacientov a s vysokou úrovňou virémie, akútna vírusová hepatitída B sa najčastejšie stáva chronickou.
Indikácie liečby chronického HBV interferónu-alfa by sa mali považovať za indikátory aktívnej replikácie vírusu (detekcia HBV HBV, HBeAg a HBV DNA v krvnom sére počas predchádzajúcich 6 mesiacov).
Kritériom hodnotenia účinnosti liečby je vymiznutie HBEAg a HBV DNA v krvi, čo je zvyčajne sprevádzané normalizáciou hladín transamináz a dlhodobou remisiou ochorenia, HBV DNA zmizne z krvi do 5. mesiaca liečby u 80% pacientov. Zníženie úrovne virémie o 85% alebo viac do tretieho dňa od začiatku liečby v porovnaní s východiskovým stavom je rýchle a pomerne presné kritérium na predpovedanie účinnosti liečby.
Výskum vírusovej hepatitídy metódou ife
ELISA pri diagnostike vírusovej hepatitídy. Možnosti imunotestu enzýmu
Špecifická laboratórna diagnostika vírusovej hepatitídy je založená na použití imunochemických a molekulárno-biologických výskumných metód. Hlavnými imunochemickými metódami sú rádioizotopy alebo rádioimunitné (RIA) a imunoanalýzy (ELISA). Imunochemické diagnostické metódy sú založené na špecifickej interakcii antigénu - protilátky s následnou identifikáciou komplexu pomocou špeciálnych značiek. Najbežnejší enzýmový imunotest.
Prvé správy o používaní enzýmového imunotestu. ako metóda na stanovenie akýchkoľvek látok boli v roku 1971 publikované súčasne dvomi výskumnými skupinami - V. Van Weemen, A. Schuurs a E. Engvall, P. Perlmann. Enzýmová imunoanalýza je založená na nasledujúcom princípe: na pevnej fáze, ktorá využíva hlavne povrch jamiek polystyrénovej tablety, je fixovaný antigén infekčného agens alebo protilátky (často zmes protilátok) na antigény, ktoré majú byť detegované. Tento antigén alebo protilátky, ktoré sú fixované na pevnej fáze, sa nazývajú imunosorbent.
V dôsledku inkubácie imunosorbentu a testovaného séra v prítomnosti detegovateľného činidla sú naviazané na komplex antigén - protilátka. Po premývacom postupe, počas ktorého sa odstránia neviazané antigény a protilátky, sa uskutoční inkubácia s konjugátom. Ako konjugát na detekciu HBsAg sa používajú anti-HBs, na detekciu protilátok proti vírusu hepatitídy C - protilátky proti ľudským imunoglobulínom (konjugát s vírusom) značený chrenovou peroxidázou. Výsledkom tejto inkubácie je naviazanie na už existujúce antigénové komplexy - protilátka dodatočne zavedeného konjugátu. Po odstránení neviazaného konjugátu (premytie) sa substrát zavedie do jamiek. Pri použití peroxidázového konjugátu sa peroxid vodíka používa ako substrát v kombinácii s indikátorom, ktorý sa najčastejšie používa ako orto-fenyléndiamín (OPD) alebo tetrametylbenzidín (TMB). Výsledok sa odhaduje fotometricky.
Kvalita a spoľahlivosť analytických schopností metódy enzýmového imunotestu je charakterizovaná množstvom kritérií, medzi ktoré patrí citlivosť, špecifickosť, presnosť a reprodukovateľnosť.
Citlivosť je minimálne množstvo látky, ktoré možno zistiť enzýmovým imunotestom. V tomto prípade je dolnou hranicou citlivosti tejto metódy koncentrácia testovanej látky vo vzorke, ktorá zodpovedá najmenšiemu pozitívnemu výsledku stanovenia, ktorý je štatisticky významne odlišný od ukazovateľov zámerne negatívnych vzoriek. Citlivosť IFTS závisí od mnohých okolností súvisiacich s návrhom testovacieho systému (afinita imunosorbentu, kvalita extrakčných a pufrových systémov) a rozlíšenie a presnosť registračnej metódy.
Špecifickosť - schopnosť presne identifikovať zložky, na ktorých určenie je tento enzýmový imunotest určený. Špecificita ELISA je do značnej miery determinovaná skríženou reakciou protilátok alebo antigénov (to znamená kompozície použitej ako imunosorbent) s blízkymi zlúčeninami, ako aj zložením inkubačného média (matricový efekt).
Správnosť - zhoda priemernej hodnoty výsledkov opakovaných stanovení tej istej kontrolnej vzorky so skutočnou hodnotou meraného parametra. Presnosť stanovenia v teste ELISA závisí od kvality testovacieho systému a kontrolnej vzorky. U dobrých testovacích systémov s imunoanalýzou sú indikátory správnosti v rozsahu 90-110%. Zvláštnosťou biomedicínskeho výskumu v ELISA je nemožnosť stanoviť presnú hodnotu, a preto sa za skutočnú hodnotu berie priemer niekoľkých odborných laboratórií. Štatistickým kritériom pre správnosť je aritmetický priemer a stupeň jeho odchýlky od skutočnej hodnoty vyjadrenej v percentách.
Reprodukovateľnosť - schopnosť testovacieho systému ukázať rovnaké hodnoty pri opakovaných štúdiách tej istej vzorky. Reprodukovateľnosť závisí jednak od náhodných chýb (chýb) počas postupu reakcie, ako aj od kvality testovacích systémov a presnosti spôsobu zaznamenávania výsledkov. Predpokladá sa, že reprodukovateľnosť rovnakých kontrolných vzoriek tej istej spoločnosti v rôznych laboratóriách by nemala prekročiť hodnotu variačného koeficientu 15%.
Existuje niekoľko špecifických schém ELISA na stanovenie markerov vírusovej hepatitídy: a) priamy enzýmový imunotest; b) nepriamy enzýmový imunotest; c) kompetitívna inhibícia; c) metóda „trap“ alebo „capture“.
Z molekulárno-biologických metód na diagnostiku vírusovej hepatitídy sa bežne používa polymerázová reťazová reakcia a hybridizácia. Tieto metódy, najmä PCR, umožňujú detekciu veľmi malých množstiev špecifickej vírusovej DNA alebo RNA, a teda replikáciu sudcu a v niektorých prípadoch replikačnú aktivitu.
Krvný test hepatitídy C
Hepatitída C je jedným z najčastejších ochorení pečene, ktoré sa vyskytuje pri infikovaní vírusom hepatitídy C (HCV), ktorý vstupuje do tela predovšetkým vtedy, keď prichádza do styku s krvou infikovanej osoby. Vyskytuje sa chronická a akútna hepatitída C. U 70-80% pacientov s akútnou hepatitídou C nie sú príznaky ochorenia, iba v niektorých prípadoch po určitom čase po infekcii sa prejavujú prejavy ochorenia, ktoré sa prejavujú únavou, bolesťou brucha, stratou chuti do jedla, stmavnutím. moč, zvracanie, nevoľnosť, zosvetlenie výkalov, žltačka, bolesť v kĺboch. Spravidla sa príznaky vyskytujú 6-7 týždňov po infekcii, ale trvanie nástupu príznakov ochorenia sa pohybuje od 2 týždňov do šiestich mesiacov. Ak sa objavia vyššie uvedené príznaky, musíte sa poradiť s lekárom infekčných chorôb a mať krvný test na hepatitídu C. Diagnóza hepatitídy, ktorá sa vykonáva včas, môže odhaliť ochorenie v jeho raných štádiách a výrazne zvýšiť šance na zotavenie.
Keď je naplánovaný test hepatitídy C
Situácie, keď sa vyžaduje test na hepatitídu C:
- počas plánovaného tehotenstva a rodiny;
- pacientov so symptómami chronickej alebo akútnej hepatitídy;
- osoba je ohrozená. Sú to zdravotnícki pracovníci, osoby vo väzení, policajti, ľudia, ktorí užívajú drogy, majú veľký počet sexuálnych partnerov, majú AIDS, sú na hemodialýze a iní.
Príprava na analýzu hepatitídy C
Špeciálna príprava na analýzu hepatitídy C sa nevyžaduje. Na analýzu sa odoberá krv zo žily na lačný žalúdok a súčasne musí uplynúť najmenej osem hodín po poslednom jedle.
Testy ELISA na hepatitídu C
Prvá analýza, zvyčajne predpísaná na diagnostiku hepatitídy C - ELISA test (enzým-spojený imunosorbent test). Testy ELISA na hepatitídu C umožňujú detekciu prítomnosti protilátok proti vírusu hepatitídy C (anti-HCVAb) v krvi. Ak je výsledok testu ELISA pozitívny, indikuje prítomnosť kontaktu tela s vírusom hepatitídy C. 40% ľudí, ktorí majú pozitívny test ELISA, však vírus nerozpoznáva v krvi. Tento jav sa nazýva falošne pozitívny výsledok. Pomocou ELISA sa tiež kontroluje krv darcu.
RIBA pre hepatitídu C
RIBA analýza hepatitídy C sa používa na potvrdenie pozitívneho výsledku ELISA. Metóda rekombinantnej imunoblotingu (RIBA) je presnejšia štúdia prítomnosti protilátok proti vírusu hepatitídy C. Prítomnosť vírusu hepatitídy C v tele tiež neurčuje pozitívny výsledok, ale iba potvrdzuje prítomnosť protilátok.
Testy PCR na hepatitídu C
Na zistenie prítomnosti vírusov hepatitídy C v krvi (HCV RNA) a na stanovenie diagnózy najčastejšie používajú analýzu metódou polymerázovej reťazovej reakcie (PCR). Táto štúdia umožňuje s vysokou presnosťou zistiť prítomnosť malého množstva vírusu v krvi. PCR analýza hepatitídy C môže odhaliť prítomnosť vírusu už 5 dní po infekcii, dlho pred objavením sa protilátok. Ak je výsledok PCR analýzy pozitívny, znamená to prítomnosť aktívnej infekcie.
Existujú také variácie PCR analýzy:
- kvantitatívna PCR, ktorá umožňuje určiť nielen prítomnosť vírusu, ale aj vírusovú záťaž (množstvo vírusu). Tento ukazovateľ má veľký význam pre určenie účinnosti liečby;
- genotyp, ktorý stanovuje genotyp vírusu hepatitídy C, ktorý je dôležitý na určenie trvania a taktiky liečby. Existuje viac ako 10 genotypov vírusu hepatitídy C, ale pre klinickú prax stačí definovať päť najbežnejších typov: 1a, 1b, 2,3a / 3b.
Vykonáva sa kvantitatívna analýza PCR:
- s kvalitatívnym pozitívnym testom na prítomnosť RNA vírusu hepatitídy C v sére;
- na presné posúdenie účinnosti liečby;
- určiť taktiku liečby pacienta.
Neexistuje priamy vzťah medzi závažnosťou hepatitídy C a množstvom vírusu v krvi. Koncentrácia vírusu ovplyvňuje infekčnosť ochorenia, to znamená, že čím väčšie je množstvo vírusu v krvi pacienta, tým väčšie je riziko prenosu vírusu, napríklad pohlavným stykom alebo z matky na dieťa. Účinnosť liečby závisí aj od koncentrácie vírusu. Počas terapie je priaznivým faktorom nízka vírusová záťaž a veľmi vysoká je nepriaznivá.
Analýza genotypov sa vykonáva:
- s kvalitatívnym pozitívnym testom na prítomnosť RNA vírusu hepatitídy C v sére;
- na presné posúdenie účinnosti liečby;
- určiť taktiku liečby pacienta;
- predpovedať chronizáciu infekčného procesu;
- na určenie progresie ochorenia.
Detekcia genotypu vírusu má veľký význam pre stanovenie trvania liečby, čo je dôležité, pretože interferón má široké spektrum vedľajších účinkov a nízku toleranciu pacienta.
Dekódovacia analýza hepatitídy C
Normálne vírusová RNA, protilátky proti nim a antigény úplne chýbajú. Prítomnosť protilátok v krvi indikuje prítomnosť chronickej alebo akútnej hepatitídy C alebo doby zotavenia. Ak je HCV RNA prítomná v krvi, ktorá sa stanoví pomocou PCR analýzy, znamená to prítomnosť vírusu v krvi.
Pri nesprávnej testovacej technike, prevoze a abnormalitách krvi môže analýza PCR niekedy vykazovať falošne pozitívne výsledky. Analýzy ELISA a RIBA v skorých štádiách ochorenia, keď telo ešte nevyprodukovalo dostatočné množstvo protilátok, môžu vykazovať falošne negatívny výsledok.
Ak sa pri dešifrovaní testu na hepatitídu C získajú pozitívne výsledky, je potrebné kontaktovať lekára a gastroenterológa na ďalšiu diagnostiku a liečbu.
Segmentované neutrofily sa znížili
Detské doštičky sú normálne, zvýšené, znížené
Hormón stimulujúci štítnu žľazu TGT
Diagnóza hepatitídy
Nie je možné okamžite zistiť prítomnosť hepatitídy v tele, pretože inkubačná doba ochorenia môže trvať až štyri týždne. Keď sa objavia prvé príznaky choroby, radikálne zmeny v zložení krvi sa vyskytujú v postihnutom organizme: biochemická analýza uvádza závažný zdravotný problém a prítomnosť patogénneho vírusu. Aby sme však urobili konečnú diagnózu, nestačí darovať krv na hepatitídu, ako aj podrobnú diagnózu hepatitídy.
Laboratórna diagnostika hepatitídy
Je žiaduce vykonať ju po skončení inkubačnej doby, aby lekár s maximálnou presnosťou mohol určiť ochorenie pečene prítomné v tele. V opačnom prípade predpísaná liečba neposkytne požadovaný terapeutický účinok a dokonca zhorší prevládajúci klinický obraz.
Diagnóza hepatitídy A
Typicky diagnóza hepatitídy A začína podrobným vypočúvaním pacienta a vymenovaním niekoľkých testov, ktoré sa musia vykonať čo najskôr. Toto je:
- biochemický krvný test;
- úplný krvný obraz;
- PCR metóda;
- ELISA;
- koagulácie.
Ak postupuje Botkinova choroba, potom sa podľa výsledkov biochemickej analýzy krvi pozoruje abnormálny skok bilirubínu, AlAT a AsAT, vzorky tymolu. Okrem toho sa produkujú špecifické anti-HAV IgM, ktoré sú nezvratnou skutočnosťou prítomnosti hepatitídy A.
Všeobecne je analýza krvi určená poklesom leukocytov, skokom v ESR a lymfocytózou. A napriek tomu je najspoľahlivejšia metóda PCR, ktorá určuje indikátor RNA patogénneho vírusu.
Okrem toho lekár skúma príznaky ochorenia, po ktorých môže urobiť konečnú diagnózu a preraziť na najúčinnejšiu liečbu. Potreba inštrumentálneho vyšetrenia je veľmi zriedkavá. Po úspešnej konzervatívnej liečbe v podmienkach hospitalizácie a karantény pacienta čaká konečné uzdravenie a hepatitída A sa už nevráti.
Diagnóza hepatitídy B
Stanovenie prítomnosti vírusu hepatitídy B je možné aj podľa výsledkov laboratórnych testov, a preto je prvá vec potrebná na darovanie krvi na hepatitídu. Patogénny vírus má prirodzene tri hlavné antigény - HBsAg, HBcAg a HBeAg, na ktoré sa v tele produkujú protilátky. Hlavným znakom tohto klinického obrazu je ELISA - ELISA, ktorá len odhalila špecifické markery hepatitídy B.
Ihneď by sa malo objasniť, že antigén HBsAg sa objavuje v krvi ešte pred prvými príznakmi hepatitídy a je spoľahlivo stanovený v ikterickom období. Negatívny test však nevylučuje prítomnosť hepatitídy B, a preto vyžaduje použitie rovnako účinnej metódy polymerázovej reťazovej reakcie (PCR).
Ak máte podozrenie, že hepatitída B je povinná, je biochemický krvný test, ktorý sa odporúča prejsť na prvé miesto. Uskutočňovanie biopsie pečene a ultrazvuku peritoneálnych orgánov je diskutované individuálne, ale keď je história ochorenia veľmi jasná, nie sú potrebné klinické vyšetrovacie metódy.
Pečeňový echogram pri autoimunitnej hepatitíde v štádiu chronickej hepatitídy
Diagnóza hepatitídy C
Aby sa táto diagnóza, nestačí darovať krv na hepatitídu, pretože vírus môže prevládať v tele v latentnej forme. Hlavnými laboratórnymi testami sú však všetky uvedené analýzy, ako aj dodatočný výkon biopsie pečene. Toto mikroskopické vyšetrenie biologického materiálu (v našom prípade kúsok tkaniva pečene) určuje rozsah patologického procesu a fibrózy tkaniva. Odber vzoriek sa vykonáva v lokálnom anestetiku, komplikácie takéhoto postupu sú v lekárskej praxi mimoriadne zriedkavé.
Ak je podozrenie na hepatitídu C, hlavnou metódou klinického vyšetrenia je ultrazvuk peritoneálnych orgánov. Dôvod je jednoduchý: choroba sa často prejavuje vizuálnou zmenou v postihnutej pečeni, zmenami v jej štruktúre a veľkosti. Týmto spôsobom môžete určiť:
- veľkosť pečene, sleziny, pankreasu a žlčníka;
- patologické zmeny v týchto orgánoch;
- celkový prietok krvi v peritoneálnych orgánoch;
- optimálnu oblasť na vykonávanie biopsie pečene.
Táto metóda klinického vyšetrenia určuje všetky fokálne patologické stavy orgánu na mikroskopickej úrovni. Ak je pečeň na obrazovke zobrazená v šedej škále, je potrebná okamžitá biopsia, pretože sivá farba zobrazuje postihnuté tkanivá „ľudského filtra“.
Prevencia hepatitídy
Keďže sa choroba neprejavuje okamžite, je ďaleko od všetkých klinických obrázkov, ktoré sa dostanú k okamžitej liečbe. Pacient si jednoducho nemôže byť vedomý existencie patogénneho vírusu v tele, ktorý sa rýchlo šíri do krvného obehu a infikuje zdravé pečeňové bunky.
Aby sa zabránilo takémuto tragickému osudu, odporúča sa dodržiavať všetky preventívne opatrenia. Takáto ostražitosť výrazne zníži riziko chorobnosti a zachráni vás pred vážnymi zdravotnými problémami v budúcnosti. Základné pravidlá prevencie sú uvedené nižšie:
- umyte si ruky po ulici;
- podliehať vysokokvalitnej spracovateľskej čerstvej zelenine a ovocím;
- vykonávať všetky preventívne očkovania uvedené v ročnom kalendárnom pláne;
- selektívny prístup k sexuálnym partnerom;
- vyhnúť sa kontaktu s chorými ľuďmi;
- používajte len jednorazové striekačky a buďte obzvlášť ostražití na staniciach na transfúziu krvi.
Odporúča sa tiež pravidelne (raz za šesť mesiacov) darovať krv na hepatitídu, aby sa zabezpečilo, že vírus neprenikne do tela a neinfikuje raz zdravé pečeňové bunky. Ak je stanovená diagnóza, je potrebné okamžite sa stať výdajným účtom a dodržiavať všetky odporúčania špecialistu.
Autor publikácie:
Syropyatov Sergej Nikolajevič
Vzdelanie: Štátna zdravotnícka univerzita v Rostove (Štátna zdravotnícka univerzita v Rostove), Katedra gastroenterológie a endoskopie.
gastroenterológ
Lekár lekárskych vied