Počítanie bielych krviniek

Princíp. Počítanie leukocytov počas mikroskopie v určitom počte štvorcov počítacej komory a výpočet ich počtu v 1 litri krvi, berúc do úvahy riedenie krvi a objem počítacej komory.

Činidlo: 3-5% roztok kyseliny octovej, tónovaný na farbenie jadier leukocytov niekoľkými kvapkami roztoku metylénovej modrej. Roztok má modrú farbu, môže byť dlhodobo skladovaný.

Priebeh odhodlania. V suchej skúmavke zalejeme 0,4 ml roztoku kyseliny octovej. Z prsta sa odoberá 0,02 ml krvi (môžete použiť antikoagulačne stabilizovanú žilovú krv). Utrite špičku pipety, potom z nej vyfúknite krv na dno skúmavky, premiešajte, znovu vytáčajte a vyfúknite zmes krvi a činidla (pipetovanie). Skúmavku označte a nechajte ju odpočítavať. Zmes krvi skladujte s roztokom kyseliny octovej maximálne 2 - 4 hodiny.

Krv zriedená v skúmavke s kyselinou octovou, dôkladne premiešajte a naplňte ju počítacou komorou. Naplnená komora sa ponechá v horizontálnej polohe 1 minútu, aby sa usadili biele krvinky. Bez zmeny horizontálnej polohy kamery ho umiestnia na stôl mikroskopu a pri malom zväčšení (okulár 10 ×, objektív 8 ×) spočítajú biele krvinky na 100 veľkých štvorcoch, čo zodpovedá 1600 malým.

Pre väčšiu presnosť sú leukocyty počítané naprieč mriežkou vo veľkých štvorcoch, ktoré nie sú rozdelené do malých štvorcov a pásikov, začínajúc od ľavého horného rohu mriežky. Pre lepší kontrast stmavte zorné pole, upustite kondenzátor a zatvorte otvor. Bunky umiestnené vo vnútri štvorca a ležiace na ľubovoľných dvoch líniách sa počítajú, aby sa nepočítala rovnaká bunka dvakrát.

Výpočet počtu leukocytov sa vykoná podľa vzorca: t

kde X je počet leukocytov v 1 μl krvi; a - počet leukocytov na 100 veľkých štvorcoch; 20 - riedenie krvi; 100 je počet veľkých štvorcov; 250 je konverzný faktor na 1 μl, pretože objem jedného veľkého štvorca je 1/250 μl (strana štvorca je 1/5 mm, výška je 1/10 mm).

V praxi sa na výpočet počtu leukocytov v 1 μl krvi ich počet v 100 veľkých štvorcoch vynásobí 50 a v 1 litri - výsledná hodnota sa vynásobí číslom 106.

Poznámka. Pri počítaní leukocytov je chyba nevyhnutná v 6–8% prípadov.

1. Pri veľkom počte normocytov v periférnej krvi sa počítajú v počte leukocytov (leukocytov aj normocytov - nukleových buniek). Aby sa správne stanovil počet leukocytov, z celkového počtu nukleovaných krvných buniek by sa mal odčítať počet normocytov.
2. Zostávajúce chyby sú podobné tým, ktoré vznikajú pri výpočte počtu červených krviniek v počítacej komore.

Počet leukocytov

Zber krvi v mixéri leukocytov na značku 0,5. Okamžite pridajte do krvi riediaci roztok 3% kyseliny octovej po značku 11. Dôkladne premiešajte obsah kapiláry a naplňte ho Goryaevovou komorou. Počítanie sa vykonáva na najmenej 100 veľkých štvorcoch. Jedná sa o veľké neoznačené čiary, ktoré sú zoskupené do štyroch v mriežke kamery Goryaev. Vypočítajte počet leukocytov v 1 l krvi podľa vzorca: t

L = N x 4000 x 20 x 10 6

kde: N je počet leukocytov v sto veľkých štvorcoch; 4000 je multiplikátor, ktorý znižuje objem malého štvorca na objem 1 μl krvi; 20 - korekcia stupňa riedenia krvi; 1600 - počet leukocytov v malých štvorcoch; 10 6 - počet mikrolitrov v 1 l.

Odporúčania na registráciu

Na záver, porovnajte získané výsledky s normálnymi hodnotami.

Lab № 7.3

Stanovenie množstva hemoglobínu v krvi

194.48.155.245 © studopedia.ru nie je autorom materiálov, ktoré sú zverejnené. Ale poskytuje možnosť bezplatného použitia. Existuje porušenie autorských práv? Napíšte nám Kontaktujte nás.

Zakázať adBlock!
a obnoviť stránku (F5)
veľmi potrebné

Počítanie bielych krviniek

Leukocytóza môže byť absolútna (verná) a relatívna (redistributívna).

Absolútna leukocytóza sa pozoruje pri akútnych zápalových procesoch, nekróze tkaniva, akútnych bakteriálnych infekciách (s výnimkou týfusovej horúčky, brucelózy, tularémie atď.), Alergických stavoch, zhubných nádorov (s poškodením tkaniva), poranení hlavy a krvácaní v mozgu, diabete. uremická kóma, šok, akútna strata krvi, ako primárna reakcia - s radiačnou chorobou. Významné zvýšenie počtu leukocytov sa vyskytuje pri leukémii.

Relatívna (redistributívna) je dôsledkom prijatia leukocytov v prietoku krvi z orgánov, ktoré slúžia pre jej depot. Vyskytuje sa po jedle (leukocytóza jedla), horúcich a studených kúpeľoch, silných emóciách (vegetovaskulárna leukocytóza), intenzívnej svalovej práci (myogénna leukocytóza) atď.

Leukopénia. Leukopénia sa považuje za indikátor inhibície funkčnej schopnosti kostnej drene v dôsledku vystavenia toxickým látkam (arzén, benzén, atď.), Niektorým liekom (sulfanilamidy, chloramfenikol, butadión, imuno, cyklofosfamid atď.), Vírusom (chrípka, vírusová hepatitída), osýpky, atď.), mikróby (týfus, brucelóza atď.), ionizujúce žiarenie, röntgenové žiarenie a hypersplenizmus (zvýšená funkcia sleziny).

Leukocytóza a leukopénia sú zriedkavo charakterizované úmerným zvýšením (poklesom) celkového počtu leukocytov všetkých typov (napríklad leukocytóza so zhrubnutím krvi); vo väčšine prípadov dochádza k zvýšeniu (poklesu) počtu akéhokoľvek typu buniek, preto sa používajú termíny „neutrofília“, „neutropénia“, „lymfocytóza“, „lymfopénia“, „eozinofília“, „eozinopénia“, „monocytóza“, „monocytopénia“., "Basophilia."

Pri klinickom hodnotení zmien v počte leukocytov je veľký význam pripisovaný percentuálnemu pomeru jednotlivých foriem leukocytov, to znamená vzorca leukocytov.

Počet leukocytov v krvi zdravej osoby:

Relatívna suma Absolútna suma

Basofily ……………………….0-1% 0-0,0650 x 10 9 / l

Eozinofily …………………….0,5-5% 0,02-0,30 x 10 9 / l

Neutrofily: - myelocyty............ 0% chýba

- bodol... 1 až 6% 0,040 až 0,300 x 10 9 / l

- segmentované….47-72% 2,0-5,5 x 10 9 / l

Lymfocyty …………………………….19-37% 1,2-3,0 x 10 9 / l

Monocyty ………………………….3-11% 0,09-0,6 x 10 9 / l

Počítanie leukocytov sa vykonáva v farbených periférnych krvných náteroch. Pre správnu interpretáciu výsledkov štúdie leukocytárneho vzorca sa odporúča počítať v absolútnych množstvách, ale nie v relatívnych. Najbežnejšie metódy maľovania náterov Romanovsky-Giemsa, Pappenheim. Pri ponorení sa počíta najmenej 200 buniek a potom sa odvodí percentuálny pomer určitých typov leukocytov. Analýza leukogramu s prihliadnutím na ďalšie parametre krvi a klinický obraz je hodnotnou metódou vyšetrenia, pomáha pri diagnostike a stanovení prognózy ochorenia.

Hlavné príčiny neutrofílie.

Akútne bakteriálne infekcie - lokalizované a generalizované.

Zápal alebo nekróza tkaniva.

Liečivé účinky (kortikosteroidy).

Hlavné príčiny neutropénie.

Infekcie - bakteriálne (brušný týfus, brucelóza, tularémia, paratyfatická horúčka) a vírusové (infekčná hepatitída, osýpky, chrípka, rubeola a iné).

Myelotoxické účinky a potlačenie granulocytopoézy (ionizujúce žiarenie; chemické látky - benzén, anilín, DDT; liečivé účinky - cytostatiká a imunosupresíva; vitamín B)₁₂-anémia s nedostatkom kyseliny listovej, akútna aleukemická leukémia, aplastická anémia).

Expozícia protilátok (imunitné formy) - precitlivenosť na lieky, autoimunitné ochorenia (SLE, reumatoidná artritída, chronická lymfatická leukémia), izoimunitné prejavy (hemolytické ochorenie novorodenca).

Redistribúcia a depozícia v orgánoch - šokové stavy, ochorenia so splenomegáliou a hypersplenizmus.

Dedičné formy (familiárna benígna chronická neutropénia).

Hlavné príčiny eozinofílie.

Parazitické invázie (trichinóza).

Chronické kožné lézie - psoriáza, pemfigus, ekzém.

Nádory (eozinofilné varianty leukémie).

Iné ochorenia - fibroplastická endokarditída Lefflera, šarlach.

Vo fáze obnovy infekcií a zápalových ochorení (priaznivé prognostické príznaky).

Príčiny eozinopénie (aneosinofília).

Zvýšená aktivita adrenokortikosteroidov v tele.

Hlavné príčiny bazofílie:

Chronická myeloidná leukémia a erytrémia.

Hlavné príčiny monocytózy.

Subakútne a chronické bakteriálne infekcie.

Parazitárne infekcie - leishmanióza, malária.

Hemoblastóza - monocytová leukémia, lymfogranulomatóza, lymfómy.

Ďalšími stavmi sú SLE, sarkoidóza, reumatoidná artritída, infekčná monocytóza; v období zotavovania sa z infekcií, pri opúšťaní agranulocytózy, po splenektómii.

Zníženie počtu monocytov je dôležité najmä pri hodnotení pomeru lymfocytov a monocytov pri pľúcnej tuberkulóze.

Hlavné príčiny lymfocytózy.

Infekcie - akútne vírusové (infekčná mononukleóza, osýpky, rubeola, kuracie kiahne), chronické bakteriálne (tuberkulóza, syfilis, brucelóza), protozoálne (toxoplazmóza).

Hemoblastóza (lymfocytová leukémia, lymfóm).

Iné ochorenia - hypertyreóza, Addisonova choroba, vitamín B₁₂-anémie z nedostatku folikulov, hypo- a aplastickej anémie.

Lymfocytopénia sa pozoruje pri SLE, Hodgkinovej chorobe, rozšírenej tuberkulóze lymfatických uzlín, v terminálnom štádiu zlyhania obličiek, akútnej chorobe z ožiarenia, stavoch imunodeficiencie, pri užívaní glukokortikoidov.

Zvýšenie alebo zníženie počtu určitých typov leukocytov v krvi môže byť relatívne alebo absolútne. Ak sa uskutoční iba percento určitého typu zmien bielych krviniek, potom sa uskutoční relatívna neutrofília, relatívna eozinopénia atď. Zvýšenie alebo zníženie absolútneho obsahu akéhokoľvek typu leukocytov, tj počet týchto buniek na jednotku objemu krvi, sa nazýva absolútna neutrofília, absolútna eozinopénia atď.

Posunutie vzorca doľava (zvýšenie počtu mladých foriem neutrofilov) je známkou zápalu alebo nekrotického procesu v tele.

Posun vzorca leukocytov doprava je charakteristický pre radiačnú chorobu a vitamín B₁₂-anémia s nedostatkom kyseliny listovej.

Neprítomnosť alebo významné zníženie počtu všetkých typov granulovaných leukocytov - granulocytov (neutrofilov, eozinofilov, bazofilov) sa označuje termínom agranulocytóza. V závislosti od mechanizmu výskytu sa rozlišujú myelotoxické (účinky ionizujúceho žiarenia, cytostatický príjem) a imunitné (haptén a autoimunitné agranulocytózy).

Počet leukocytov

Metóda počítania vo fotoaparáte. Odoberanie a riedenie krvi produkovanej skúmavkovou metódou. Do skúmavky sa zavedie 0,4 ml riediacej tekutiny a 0,02 ml kapilárnej krvi (výhodne Vidalevskaya). Výsledné riedenie je prakticky považované za 1:20 3-5% roztok kyseliny octovej tónovaný metylénovou modrou sa obyčajne používa ako riedidlo (kyselina octová lyzuje erytrocyty, metylénová modrá zafarbuje jadrá leukocytov). Pred naplnením komory sa skúmavka Goryaeva so zriedenou krvou dôkladne pretrepe. Komora sa plní rovnakým spôsobom ako počítanie červených krviniek.

Leukocyty sú omnoho menšie ako erytrocyty (1 - 2 na veľké štvorce), preto sa pre presnosť počítajú v 100 veľkých štvorcoch (netriedených). Výpočet: 100 veľkých štvorcov (1600 malých) sa spočítalo leukocytom.
Pamätajúc na to, že objem malého štvorca je 1/4000 mm3 a krv sa 20-násobne zriedi, vypočíta sa počet leukocytov v 1 μl krvi: 4000 20 a vydelí 1600 = a x 1/2. Na získanie skutočného obsahu leukocytov v 1 μl krvi postačuje rozdeliť na polovicu počet získaný vo výpočte a pridať 2 nuly. Priemerná chyba metódy je ± 7%.

Presnejšie (2-3% chyba) a perfektný je počet leukocytov pomocou elektronických zariadení. Počítanie leukocytov v počítadlách častíc sa uskutočňuje podľa rovnakého princípu ako erytrocyty. Pre-blood sa zriedi a zmieša s akýmkoľvek činidlom, ktoré lýzuje červené krvinky. V automatickom analyzátore „Technicon“ sa používa roztok kyseliny octovej ako taký, v zariadeniach „Culter“ a „Celloskop“ - saponín alebo sapoglobín, ktoré sa pridávajú zriedené (1: 500, 1: 700) v izotonickom roztoku chloridu sodného (6 kvapiek na 20 ml). riedenie).

Počítanie krvných leukocytov sa vykonáva na farbených periférnych krvných náteroch.
Je lepšie počítať v najtenšom mieste blízko konca steru, najmenej 200 buniek (s výnimkou výraznej leukopénie) a potom odvodiť percentuálny pomer určitých typov bielych krviniek. Počítanie sa odporúča v rovnakom poradí: polovica buniek by sa mala počítať v hornej časti, polovica v dolnej časti mŕtvice, bez toho, aby sa pohybovala až na okraj a stred, cik-cak (3-4 polia v smere zdvihu, 3-4 polia v pravom uhle k stredu mŕtvice, potom 3-4 polia na stranu rovnobežne s okrajom, opäť v pravom uhle smerom nahor a tak ďalej na jednej strane).

Príprava náterov. Opatrne umyté a odtučnené sklo (jeho okraj) sa dotýka kvapky krvi v mieste vpichu injekcie. Brúsenie skla sa vykonáva tak, že sa brúsne sklo umiestni pod uhlom 45 ° k sklzu pred kvapkou. Potom, čo priniesol sklo do tejto kvapky, čakajú, kým sa krv šíri pozdĺž jej okraja, potom rýchlym pohybom vykonajú brúsne sklo vpred, pričom ho neberú preč od objektu predtým, než vyschne celú kvapku.

Správne urobený náter má žltkastú farbu (tenkú), nedosahuje okraje skla a končí v stope (fúzy).

Farbenie suchých škvŕn po predbežnej fixácii. Najlepšia fixácia sa dosiahne v absolútnom metylén-alkohole (3-5 minút) alebo v zmesi Nikiforova s ​​rovnakými dielmi absolútneho etanolu a éteru (30 minút).

Medzi hlavné hematologické farby patria metylénová modrá a jej derivát - azurová I (metylénová azúrová) a azurová II (zmes rovnakých častí azúrovej I a metylénovej modrej), kyslá - vo vode rozpustná žltá eozín.

● Maľba Romanovského-Giemsu. Farba Romanovsky-Giemsa (vyrobená z výroby) má nasledujúce zloženie: Azur II - 3 g, vo vode rozpustný žltý eozín - 0,8 g, metylalkohol - 250 ml a glycerín - 250 ml. Pracovný náterový roztok sa pripraví rýchlosťou 1,5-2 kvapiek hotového náteru na 1 ml destilovanej vody. Farba sa naleje na škvrnu s vyššou vrstvou; čas farbenia - 30-35 minút Po tomto čase sa tampóny premyjú vodou a vysušia na vzduchu. V tejto metóde je možné dobre rozlíšiť jadro, ale neutrofilná granularita cytoplazmy je oveľa horšia, takže sa široko používa na farbenie periférneho krvného náteru.

Kombinované farbenie May-Grunwald-Romanovsky-Giemsa podľa Pappenheima. Hotové farbivo, fixačné činidlo May-Grunwald, čo je roztok eozínometylénovej modrej v metylénalkohole, sa napipetuje na fixovaný náter počas 3 minút. Po 3 minútach sa do náteru, ktorý kryje roztok, pridá rovnaké množstvo destilovanej vody a farbenie pokračuje ďalšiu 1 minútu. Potom sa farba zmyje a rozter sa vysuší na vzduchu. Potom sa vysušený náter premaľuje čerstvo pripraveným vodným roztokom Romanovského farby po dobu 8-15 minút. Táto metóda je považovaná za najlepšiu, najmä pre šmuhy punkcií kostnej drene.

Zvýšenie počtu leukocytov v periférnej krvi nad normálnu hladinu sa nazýva leukocytóza, pokles sa nazýva leukopénia. Leukocytóza (leukopénia) je zriedkavo charakterizovaná proporcionálnym zvýšením (poklesom) počtu leukocytov všetkých druhov, napríklad leukocytózou so zhrubnutím krvi. Vo väčšine prípadov dochádza k zvýšeniu počtu (poklesu) akéhokoľvek typu buniek. Zvýšenie alebo zníženie počtu jednotlivých typov leukocytov v krvi môže byť relatívne alebo absolútne v závislosti od celkového počtu leukocytov - normálne, zvýšené alebo znížené. Zmena počtu, pomeru jednotlivých foriem a morfológie leukocytov závisí od typu a virulencie patogénu, povahy, priebehu a rozsahu patologického procesu, individuálnej reakcie organizmu.

Leukocyty (leukocytus)

Leukocyty. Kvantitatívne stanovenie leukocytov. Počítanie leukocytov pomocou kamery Goryaeva. Kvantitatívny obsah leukocytov. Leukocytóza.

Biele krvinky

Počet leukocytov v krvi závisí jednak od rýchlosti ich tvorby, jednak od ich mobilizácie z kostnej drene, ako aj od ich využitia a migrácie do tkanív (do lézií), odobratia pľúc a sleziny. Tieto procesy sú zase ovplyvnené množstvom fyziologických faktorov, a preto počet leukocytov v krvi zdravého človeka podlieha výkyvom: stúpa do konca dňa, počas fyzickej námahy, emocionálneho stresu, príjmu bielkovinových potravín a prudkých zmien teploty okolia.

Kvantitatívne stanovenie leukocytov

Leukocyty sa spočítajú pomocou kamery Goryaev a pomocou automatických počítadiel.

Počítanie leukocytov pomocou kamery Goryaeva

In vitro metódou odoberania krvi krvným leukocytom:

• Do skúmavky sa naleje 0,4 ml 3 až 5% roztoku kyseliny octovej s metylénovou modrou. Použite kapilárnu pipetu na odobratie 20 μl krvi z čerstvej kvapky (zriedenie 20-krát), opatrne ju vyfúknite do skúmavky s činidlom a opláchnite pipetu. Dobre premiešajte;
• čisté a suché krycie sklo sa vtiera do komory tak, aby sa v mieste dotyku vytvorili krúžky dúhy;
• krv zriedenú v skúmavke, dobre premiešajte. Koniec kruhovej sklenenej tyčinky berie kvapku krvi a privádza ju na okraj lešteného skla komory;
• po naplnení komory sa nechá 1 minútu v pokoji na sedimentáciu leukocytov;
• Leukocyty sa berú do úvahy pri malom zväčšení (cieľ × 8 alebo × 9, okuláre × 10 alebo × 15) so zatemneným zorným poľom (so zníženým kondenzátorom alebo zúženou membránou);
• pre uspokojivé výsledky sa leukocyty počítajú na 100 veľkých štvorcoch.

Poznajúc objem veľkého štvorca a stupeň riedenia krvi, nájdite počet leukocytov v 1 μl a 1 l krvi. Strana veľkého štvorca je 1/5 mm, plocha je 1/25 mm2, objem priestoru nad týmto štvorcom je 1/250 mm3.

Vzorec pre počítanie bielych krviniek:

kde B je počet leukocytov v 100 veľkých štvorcoch;
P - stupeň zriedenia (20).

Počet leukocytov

Norma: 4,0–9,0 × 10 9 / L

Zvýšenie počtu leukocytov nad 9,0 x 10 9 / l sa nazýva
leukocytóza, pokles ich počtu pod 4,0 × 10 9 / l - leukopénia. Normálne však môže byť dokonca 3,5 × 109 v 1 1 leukocytov pre množstvo jedincov. Podľa literatúry majú títo ľudia zvýšenú imunitnú odolnosť a je menej pravdepodobné, že ochorejú, čo sa zdá byť spôsobené potrebou imunitnej reakcie, ktorá má rezervu leukocytov v tkanivách, kde je 50-60 krát viac ako v krvnom obehu. Je zrejmé, že u zdravých jedincov s nízkym počtom bielych krviniek v periférnej krvi sa ich rezervy v tkanivách zodpovedajúcim spôsobom zvyšujú. Tento fenomén sa vysvetľuje dedičným a rodinným charakterom alebo zvýšením vplyvu parasympatického nervového systému.

Leukopénia môže byť funkčná a organická.
Funkčná leukopénia je spojená s dysreguláciou tvorby krvi a je pozorovaná:

• s niektorými bakteriálnymi a vírusovými infekciami (brušný týfus, chrípka, kiahne, rubeola, Botkinova choroba, osýpky);
• pôsobením liekov (sulfónamidov, analgetík, antikonvulzív, antitroidných, cytostatických a iných liekov);
• počas svalovej práce, zavedenie cudzieho proteínu, nervové a teplotné účinky, hladovanie, hypotonické stavy;
• falošná leukocytopénia môže byť spojená s agregáciou leukocytov počas dlhodobého skladovania krvi pri izbovej teplote (viac ako 4 hodiny).

Organická leukopénia vyplývajúca z aplázie kostnej drene a jej nahradenia tukovým tkanivom nastáva, keď: t

• aplastickú anémiu;
• agranulocytóza;
• leukopenická leukémia;
• niektoré formy Hodgkinovej choroby;
• ionizujúce žiarenie;
• hypersplenizmus (primárny a sekundárny);
• ochorenia kolagénu.

leukocytóza

Leukocytóza je reakcia hematopoetického systému na účinky
exogénne a endogénne faktory. Existujú fyziologické a patologické leukocytózy.

Fyziologická leukocytóza je:

• tráviace - po jedle, najmä s vysokým obsahom proteínov; počet leukocytov nepresahuje 10,0 - 12,0 × 10 9 / l a po 3 - 4 hodinách sa vracia do normálu;
• s emocionálnym stresom (adrenalínom), ťažkou fyzickou námahou, chladením, nadmerným slnečným žiarením (spálenie slnkom), podávaním množstva hormónov (katecholamínov, glukokortikosteroidov atď.), v druhej polovici tehotenstva, počas menštruácie a kvôli nerovnomernej distribúcii leukocytov v krvi v hlavnom prúde.

Patologická leukocytóza je rozdelená na absolútnu a relatívnu.

Absolútna leukocytóza - zvýšenie počtu leukocytov v krvi až na niekoľko sto tisíc (100,0–600,0 × 10 9 / l a viac).

• Najčastejšie pozorované pri leukémii: pri chronickej leukémii - v 98-100% prípadov, pri akútnej leukémii - v 50-60%. Zmena pomeru leukocytových buniek v kostnej dreni a vpichu krvi slúži ako základ pre diagnostiku leukémie.

Pozoruje sa relatívna leukocytóza:

• akútne zápalové a infekčné procesy, s výnimkou týfusovej horúčky, chrípky, kiahní, rubeoly, Botkinovej choroby, osýpok. Najväčšia leukocytóza (až do 70,0–80,0 × 10 9 / l) sa pozoruje pri sepse;
• pod vplyvom toxických látok (jedov hmyzu, endotoxínov), ionizujúceho žiarenia (bezprostredne po ožiarení);
• v dôsledku účinku kortikosteroidov, adrenalínu, histamínu, acetylcholínu a digitálisových prípravkov;
• s rozpadom tkaniva (nekróza), infarktom myokardu, trombózou periférnych artérií s rozvojom gangrény, popáleninami, pleurálnym výpotkom, perikarditídou, urémiou, hepatálnou kómou;
• významná strata krvi pri poraneniach, vnútornom, gynekologickom a inom krvácaní.

Zvýšenie počtu leukocytov pri infekčných ochoreniach je vo väčšine prípadov sprevádzané posunom vzorca leukocytov vľavo

Počítanie počtu leukocytov a krvných doštičiek

Faktory ovplyvňujúce správnosť štúdie bielych krviniek

- dlhodobé skladovanie krvi pri izbovej teplote

Normy obsahu leukocytov v krvi

Vek Počet leukocytov

- 1 deň 11,6 - 22,0

- 1 týždeň 8.1.- 14.3

- 1 mesiac 7.6 - 12.4

- Dospelí 4,0 - 9,0

Spôsoby stanovenia počtu leukocytov v krvi.

- Počítanie počtu leukocytov v počítacej komore

- Počítanie leukocytov v hematologických analyzátoroch

Stanovenie počtu leukocytov v počítacej komore.

- Počítanie leukocytov pod mikroskopom sa uskutočňuje po lýze červených krviniek v 100 veľkých štvorcoch počítacej mriežky a prepočítava sa na 1 liter krvi na základe objemu štvorcov a zriedenia krvi. Počet leukocytov sa má urobiť do 2-4 hodín po odbere krvi.

- Ak sú v periférnej krvi červené krvinky, nie sú lyzované a spočítané spolu s leukocytmi. V tomto prípade sa na stanovenie skutočného počtu leukocytov odčíta celkový počet buniek v červenom rade od celkového počtu spočítaných buniek.

- Napríklad: Celkový počet leukocytov vo výpočte v komore (alebo analyzátore) -45x109 / l. Pri výpočte vzorca leukocytov sa zistilo, že na 100 leukocytov je prítomných 50 erytroblastov (normoblastov).

Vypočítame skutočný počet leukocytov v krvi:

150 buniek - 45 x 109 / l

100 buniek (leukocyty) - X

X = 100 * 45 * 10 / l / 150 = 30 x 10 / l

Skutočný počet leukocytov v krvi je teda 30 x 109 / l.

Hlavné zdroje chýb pri výpočte leukocytov v komore:

- Nesprávny pomer objemu krvi a kyseliny octovej v skúmavke.

- Nesprávne pripravený roztok kyseliny octovej (v koncentrácii vyššej ako 5%, niektoré leukocyty môžu lýzovať, čo povedie k podhodnoteniu výsledku).

- Predĺžená expozícia vzorky pri teplotách nad 28 ° C, ktorá môže urýchliť lýzu leukocytov vo vzorke a viesť k podhodnoteniu výsledku.

- Nesprávne vyplnenie komory Goryaev. Rovnako ako pri výpočte červených krviniek, musí byť kamera ponechaná 1 minútu, aby sa bunky usadili.

- Kamera Goryaev nebola po predchádzajúcej definícii dostatočne umytá. Leukocyty zostávajúce v komore môžu nadhodnotiť výsledky analýzy.

Metódy počítania krvných doštičiek

- v počítacej komore

Každá skupina metód má svoje výhody a nevýhody.

- Počítanie krvných doštičiek v komore je dostatočne presné, nevyžaduje výpočet počtu červených krviniek. Na druhej strane je táto metóda pracnejšia, pretože doštičky v natívnej forme predstavujú malé a slabo kontrastné prvky. Nevýhodou tohto spôsobu je počítanie krvných doštičiek v nasledujúcich hodinách po užití krvi.

- Stanovenie počtu krvných doštičiek v krvných náteroch je výrazne nižšie v presnosti na komorovú metódu alebo automatické počítadlá. Chyby pri počítaní v krvných náteroch môžu byť spôsobené zlou kvalitou rozmazania a súvisiacou nerovnomernou distribúciou krvných doštičiek, nepresným určením počtu červených krviniek. Významnou nevýhodou tohto spôsobu je potreba súčasne počítať krvné doštičky a krvinky. Výhodou je schopnosť študovať krvné doštičky kedykoľvek, bez ohľadu na čas odberu krvi.

- Metóda stanovenia krvných doštičiek pomocou hematologického analyzátora umožňuje presne určiť počet krvných doštičiek, ich priemerný objem a distribúciu podľa objemu.

Počet leukocytov

Počet leukocytov sa vypočíta pomocou automatického počítadla alebo v Goryaevovej komore. Na počítanie leukocytov v komore sa pripraví Turková kvapalina - roztok kyseliny octovej s vodným roztokom metylénovej modrej (0,1 ml 0,1% roztoku metylénovej modrej sa pridá do 9 ml 10% kyseliny octovej). V skúmavke zalejeme 0,4 ml tekutého Türku. Získať presne 0,02 ml krvi, opatrne pridať do riediacej tekutiny. Riedenie krvi je 1:20. Dobre premiešajte a nechajte 4 minúty. Naplňte komoru Goryaeva po dôkladnom pretrepaní skúmavky so zriedenou krvou. Kamera sa ponechá 1 minútu na plochom povrchu na sedimentáciu leukocytov. Potom sa leukocyty spočítajú pri nízkom zväčšení mikroskopu (šošovka 8, okulár 10 alebo 15) s tmavým zorným poľom (so zníženým kondenzátorom alebo zúženou membránou). Leukocyty sa považujú za 100 nezverejnených veľkých štvorcov, čo zodpovedá 1600 malým. Výsledky počítania buniek vo veľkých štvorcoch sumarizujú a vypočítajú ich počet v 1 μl krvi pomocou vzorca:

kde X je počet leukocytov v 1 μl krvi; A - počet buniek počítaných v 100 veľkých štvorcoch, 1600 - počet malých štvorcov; 20 - riedenie krvi; 4000 je multiplikátor, ktorého výsledkom je objem 1 μl krvi na základe objemu malého štvorca (1/4000 μl).

Počítanie leukocytovej receptúry Vyšetrujú sa farbené periférne krvné šmuhy. Nevyhnutnou podmienkou pre správne zváženie morfologických znakov krvných buniek je správne vykonaná a dobre zafarbená krv. Krémový náter sa pripravuje na suchých, čistých, dobre odmasťovaných podložných sklíčkach, starne v zmesi Nikiforov (etylalkohol 96 ° C a dietyléter 1: 1). Ak si vezmete sklenené podložné sklíčko na dlhé okraje, dotknite sa jeho povrchu kvapkou krvi (ale nie kožou) uvoľnenou z prepichnutia, alebo aplikujte kvapku krvi mikropipetou alebo kapilárou. Sklenená šmýkačka je držaná na stole alebo v ľavej ruke pre úzke hrany. Pravou rukou aplikujte mleté ​​sklo s úzkym okrajom na sklo krvou vľavo od kvapky pod uhlom 45 ° a zatlačte ho doprava, kým sa nedotkne krvi. Čakajú, až sa krv rozprestrie po celom okraji brúseného skla, a potom rýchlym rýchlym pohybom ho odneste sprava doľava, až kým sa nevyčerpá celá kvapka. Kvapka krvi by mala byť malá a rozložená tak, aby celý náter bol položený na sklenenú podložku a nedosiahol 1-1,5 cm pred jej okrajom. Dobre spravený náter je tenký, má žltkastú farbu a končí v metle. Vzduchom sušené krvné nátery sa umiestnia do špeciálnych nádob na fixáciu alebo do bežných sklenených pohárov naplnených fixačnou kvapalinou (metylalkohol, doba fixácie 3-5 minút, etylalkohol, 30 minút; zmes Nikiforov, 20-30 minút). Fixované prípravky sa sušia na vzduchu a potom sa zafarbia farbivom Romanovsky-Giemsa. Hotový náterový roztok Romanovsky-Giemsa (azureosín) zriedený 1:10 v požadovanom objeme na farbenie. Pevné škvrny sa nalejú zriedenou farbou, ktorá sa naleje na škvrnu s možnou vyššou vrstvou. Farbenie trvá v závislosti od teploty vzduchu v miestnosti od 25 do 45 minút. Po dokončení náteru opláchnite farbu destilovanou vodou a ťahajte vertikálne v drevenom stojane na sušenie. Mikroskopia krvných náterov sa vykonáva s ponorením pri 100 x 10 zväčšení. Počítanie leukocytov sa uskutočňuje pozdĺž kľukatej línie („Meanderova línia“), počíta sa 100-200 buniek, pričom sa berie do úvahy počet jednotlivých foriem leukocytov: neutrofily bodné a segmentované, eozinofily, bazofily, monocyty, lymfocyty. Vypočítajte percento každého typu buniek.

Počítanie absolútneho počtu fagocytov a lymfocytov Absolútny počet fagocytov (neutrofilov a monocytov) a lymfocytov vyšších stavovcov sa vypočíta na základe údajov o počte leukocytov v periférnej krvi a vzorci leukocytov.

Test fagocytovej funkcie

Stanovenie fagocytového indexu a fagocytového čísla

Bolo vyvinutých veľké množstvo techník na hodnotenie absorpčnej a tráviacej aktivity leukocytov. Všetky sú založené na schopnosti fagocytov absorbovať cudzie častice, ktoré tvoria testovací systém (špecifický typ mikroorganizmu, zymosan, latex - objekt absorpcie). Zjavenie sa uskutočňuje in vitro alebo in vivo. Všeobecný priebeh stanovenia je nasledujúci: Heparinizovaná alebo citrátovaná čerstvá krv (alebo suspenzia fagocytov) sa zmieša s rovnakým objemom suspendovanej dennej mikrobiálnej suspenzie (Saccharomyces cerevisiae, Staphilococcus aureus, S. albus, E.coli, A. nydrophila) alebo iného absorpčného objektu. Zmes sa jemne premieša a umiestni do termostatu (37-40ºС - pre teplokrvné v závislosti od normálnej teploty tela, 26 ° C - pre teplomilné ryby a nižšie pre chladenie). Po 15, 30, 45, 60 a 90 minútach sa na sklíčkach pripravia šmuhy, vysušia, fixujú metylalkoholom alebo zmesou Nikiforov a zafarbia podľa Romanovského-Giemsa. Pozerajú sa na šmuhy pod ponorom a určujú fagocytovú aktivitu - percento fagocytov podieľajúcich sa na fagocytóze, fagocytový index - počet testovaných mikróbov zachytených jedným fagocytárnym leukocytom, fagocytové číslo - priemerný počet fagocytových objektov na 1 aktívny neutrofil. Hodnotenie indikátorov v rôznych časových intervaloch nám umožňuje odhadnúť dynamiku fagocytózy. Za normálnych okolností by mal byť po 90 minútach fagocytárny index nižší ako po 45 minútach a 60 minútach v dôsledku trávenia mikróbov. V prípade porušenia trávenia sa nezmení.

Hodnotenie funkčnej aktivity fagocytov redukčnou reakciou nitro-modrého tetrazolu (NBT-test) t

Tento test je indikátorom baktericídnej funkcie fagocytov a umožňuje vyhodnotiť ich schopnosť zabíjania závislého od kyslíka. Keď je tento mechanizmus zabíjania aktivovaný, aktivuje sa enzým NADPH oxidáza, čo vedie k vzniku reaktívnych foriem kyslíka vo fagocytoch. Uvoľňovanie takýchto látok v bunke sa nazýva explózia kyslíka (respiračné), ktorá môže byť registrovaná pomocou testu NBT. Vo formulácii tohto testu sa substancia nitrozíniumtetrazolium pridáva do fagocytov, je absorbovaná bunkou a v prítomnosti reaktívnych foriem kyslíka sa mení na tmavomodrú látku, diformazán. Čím viac tmavomodrých granúl je fixovaných na povrchu alebo vo vnútri fagocytov, tým viac aktívnych foriem kyslíka vzniká, tým viac je zabíjanie závislé od kyslíka.

Test NBT je nastavený v dvoch verziách: spontánne a indukované. Keď sa uskutočňuje spontánny NBT test, fagocyty sa kultivujú v prítomnosti NST bez predbežnej aktivácie buniek, pri uskutočňovaní indukovaného NBT testu sa do kultivačného média pridá aktivátor fagocytovej reakcie. Nastavenie NBT testu v dvoch variantoch umožňuje výpočet funkčnej rezervy buniek, čo je rozdiel medzi počtom (intenzitou) indukovaných buniek pozitívnych na diformazán a počtom (intenzitou) spontánnych buniek pozitívnych na diformazán. Hodnoty indukovaného NBT testu charakterizujú aktivitu fagocytových buniek v prítomnosti antigénneho stimulu a považujú sa za kritérium ich pripravenosti na úplnú fagocytózu. Spontánny NBT test umožňuje vyhodnotiť stupeň aktivácie mechanizmov zabíjania neaktivovaných fagocytov závislých od kyslíka. Charakterizuje stupeň aktivácie intracelulárnych mikrobicídnych systémov.

Na vytvorenie spontánneho testu NBT sa do 0,1 ml krvi pridá 0,05 ml 0,2% roztoku NBT v tlmivom roztoku fosforečnanu draselného (0,1, pH 7,3) a 0,05 ml rovnakého pufra. Súbežne sa umiestni vzorka, aby sa zohľadnila indukovaná skúška NBT, pri ktorej sa namiesto 0,05 ml pufra pridá rovnaký objem fagocytového aktivátora (napríklad pyrogénny pri koncentrácii 50 μg / ml). Reakčná zmes sa termostatuje vo vodnom kúpeli pri 37 ° C (30 až 60 minút). Pripravia sa škvrny so strednou hustotou, sušia sa na vzduchu a fixujú sa v etylalkohole alebo v zmesi Nikiforov (20 minút), potom sa natierajú vodným roztokom neutrálnej červene (0,1%, 1 min).

Po reakcii sa krvné škvrny podrobia mikroskopu pod ponorením (100x šošovka, 10x očko). Medzi 100 bunkami sa spočíta podiel aktivovaných neutrofilov (DAN,%) obsahujúcich granule diformazánu. Podľa množstva dipferformazanu uloženého v bunkách sa ich aktivita vyhodnocuje na ľubovoľných jednotkách a vypočíta sa index aktivácie neutrofilov (IAN, použité jednotky):

kde je H_neg. - počet buniek, ktoré neobsahujú diformazánové granule;

H₁ - počet buniek, v ktorých je plocha diformazánových ložísk menšia ako 1/3 plochy jadra;

H₂ - počet buniek, v ktorých sa usadzujú diformazány od 1/3 do celej veľkosti jadra;

H₃ - počet buniek, v ktorých ložiská diformazánov zaberajú väčšiu plochu jadra.

Odvodenie koeficientu mobilizácie (KM) vykonaného podľa tohto vzorca: t