PCR diagnostika hepatitídy C

Hepatitída C je zápal pečeňových buniek, ku ktorému dochádza v dôsledku infekcie vírusom HCV (hepatitída C) kontaktom s krvou infikovanej osoby. Genetický kód HCV flavivírusu nesie molekula RNA (kyselina ribonukleová) obsiahnutá v štruktúre vírusu. Tento život ohrozujúci jav sa vyznačuje utajením v počiatočnom štádiu patológie. Časový interval medzi infekciou a nástupom symptómov (odpoveď imunitného systému) môže byť od jedného mesiaca do šiestich mesiacov. Choroba má spravidla chronickú formu a je ťažké ju vyliečiť.

Moderná medicína vám umožňuje diagnostikovať patológiu s malým poškodením pečene. Medzi najbežnejšie a najúčinnejšie diagnostické metódy patrí analýza PCR. Zvážte v tomto článku, čo to je a aké druhy existujú.

Čo je to štúdia

PCR analýza hepatitídy C je laboratórne vyšetrenie, ktoré detekuje flavírus, genetický materiál kyseliny ribonukleelénovej (RNA). Určuje počet molekúl RNA v krvi, kvalitu biologického materiálu, genetický typ vírusu HCV.

Metóda PCR pre hepatitídu C umožňuje detegovať minimálne množstvo flaviru pred tvorbou protilátok, spravidla krátko po infekcii.

Štúdia je často označovaná ako analýza RNA, pretože detekuje častice ribonukleovej kyseliny s veľkosťou 30-60 nm obsiahnuté v flavavíruse.

Štúdia sa vykonáva nasledovne: na prázdny žalúdok pacient dáva krv zo žily, ktorá sa potom testuje rôznymi metódami:

  • PCR v reálnom čase sa uskutočňuje v uzavretom automatizovanom spôsobe a má dolnú hranicu na detekciu vírusu RNA, ktorá sa rovná 15 IU / ml;
  • COBAS AMPLICOR s citlivosťou 50-100 IU / ml.

Čím vyššia je prahová hodnota citlivosti diagnostickej techniky, tým väčšia je pravdepodobnosť nájdenia najnižšieho obsahu vírusu v biologickom materiáli, ktorý je predmetom vyšetrovania.

Aké typy analýz sa používajú

Analýza, ktorá sa úspešne používa niekoľko desaťročí, sa nazýva PCR hepatitída a dá sa ľahko a rýchlo zistiť. V medicíne existujú dve metódy reakcie, ktoré sa navzájom zásadne líšia:

  • kvalitatívna metóda odhaľuje prítomnosť v biologickom materiáli genetického zdroja špecifického vírusu;
  • kvantitatívna analýza meria počet genetických látok, ktoré umožňujú určiť štádium patológie alebo vyhodnotiť účinnosť terapeutického priebehu;
  • genotypovanie určuje typ vírusu prítomného v tele.

Všeobecne platí, že krvný test pomáha identifikovať povahu virémie a genetického typu patogénu. Výskum sa spravidla vykonáva raz v závislosti od stupňa citlivosti diagnostického systému. Ak je to potrebné, opakované testovanie sa vykonáva pomocou ultrazvukového činidla.

Vysoko kvalitná PCR

Čo je vysoko kvalitná PCR RNA pre hepatitídu C? Podstata reakcie spočíva v prítomnosti RNA sekvencie hepatitídy a reakcia je možná len v prítomnosti vírusových proteínov s podobnou etymológiou v teste ELISA. V procese porovnávania sa zistí zaťaženie a možné poškodenie oblasti pečene.

Charakteristickým znakom tejto metódy je schopnosť detegovať aj prítomnosť samostatného génu.

Treba poznamenať, že po získaní výsledkov testov PCR a ELISA si pacient vyžaduje vhodnú liečbu bez ohľadu na to, aký bol konečný výsledok imunotestu. Pozitívne indikuje infekciu a PCR negatívne indikuje redukovaný počet vírusových častíc vzhľadom na úroveň citlivosti.

Existuje niekoľko podmienok, ktoré ovplyvňujú produkciu negatívnej PCR a ELISA:

  • nedostatok vhodných podmienok zberu materiálu;
  • výsledná analýza obsahuje kontamináciu;
  • v prípade skorej injekcie heparínu pacientovi.

Pacient nemusí dodržiavať určité pravidlá odberu vzoriek krvi na analýzu PCR, v tomto prípade závisí kvalita tejto analýzy od toho, či lekár vykonal zákrok. Schopnosť stanoviť prítomnosť ochorenia (najmä v akútnej forme) sa objaví v priebehu niekoľkých týždňov po infekcii.

Kvantitatívna analýza

Kvantitatívny test sa odporúča na detekciu vírusovej záťaže bezprostredne pred tvorbou ďalšej terapie a reakcie organizmu. Proces odberu krvi sa vykonáva podobným spôsobom ako pri vysokokvalitnej PCR a ELISA, jedinou podmienkou je absencia možnosti fajčiť pacienta pred zákrokom.

Vzhľadom na charakteristiky získané štúdiom údajov je zvýšená záťaž charakterizovaná indikátormi od 800000 IU / ml, nízkymi - 400000 IU / ml. Prítomnosť vírusu v tele pacienta je indikovaná PCR na hepatitídu nie je negatívny kvalitatívny test.

Tento druh výskumu umožňuje určiť, aký nebezpečný je pre ľudí ľudí okolo neho. Napríklad identifikácia vysokej hladiny indikuje zvýšenú infekčnosť pacienta. Okrem toho výsledky analýzy pomáhajú formulovať ďalšiu najúčinnejšiu liečbu a určiť, do akej miery sa súčasná liečba považuje za účinnú.

Rýchla negatívna reakcia testov indikuje úspech zvolenej techniky a pomalá naznačuje potrebu úprav a použitia viacfázovej liečby.

Proces vykonávania analýzy závisí od konkrétneho dňa priebehu ochorenia. Prvé stanovenie sa uskutoční prvý deň po prijatí pacienta do nemocnice, potom sa postup opakuje po 4, 12 a 24 týždňoch po užití liekov.

Kvantitatívna analýza teda ukazuje, ktorá liečba je najefektívnejšia, trvanie dostupnej terapie a nebezpečenstvo pacienta vo vzťahu k iným osobám.

genotypu

V štúdii materiálovej analýzy je dôležité určiť presnosť genotypu vírusu, ktorý sa uskutočňuje. V súčasnosti existuje 11 druhov vírusu hepatitídy C, ktoré zase zahŕňajú určité poddruhy.

Všetky tieto druhy reagujú odlišne na rôzne liečby, pričom jednotlivé odrody sú absolútne odolné voči mnohým liekom.

Genotyp umožňuje určiť a ukázať stav pečene. Nie je nezvyčajné, že výsledky nie sú vo výsledkoch „typizované“, čo znamená, že týmto testovacím systémom nie je detekovaný vírus v krvi pacienta. To sa dá zistiť, ak určitý genotyp nezodpovedá tejto zóne. V takejto situácii sa analýza vykonáva opakovane a na štúdium materiálu sa používa citlivejší systém.

Ultra citlivá metóda

Ultrazvuková metóda je nevyhnutná v niektorých prípadoch, keď diagnózu hepatitídy nie je možné vykonať inými metódami, a ak je potrebné vykonať analýzu, určí ošetrujúci lekár:

  • ak máte podozrenie na prítomnosť vírusu hepatitídy C u pacientov so skrytou odrodou ochorenia;
  • prítomnosť protilátok proti vírusu hepatitídy C, ktorá nebola potvrdená PCR diagnostikou;
  • aby sa určila kvalita účinnosti zvoleného spôsobu liečby a potvrdila eliminácia ochorenia.

Citlivosť tejto metódy je oveľa vyššia ako citlivosť bežne používaná, avšak táto metóda nevylučuje získanie falošných výsledkov, pozitívnych aj negatívnych. V takejto situácii je dôležité kontrolovať kvalitu postupu a možnosť kontaminácie samotného materiálu.

Vysvetlenie PCR analýzy

Dekódovanie analýzy sa vykonáva na základe predložených materiálov, pričom výsledky laboratórneho výskumu zahŕňajú určité údaje opísané vyššie.

Transkript môže zahŕňať pozitívnu PCR polymerázovú reťazovú reakciu a negatívny test ELISA v teste, čo znamená, že pacient nemá žiadne príznaky hepatitídy C v krvi, ale v minulosti preniesol akútnu formu ochorenia. Spravidla sa pri diagnostikovaní špecialisti uchyľujú k použitiu indikátorov testu PCR.

Ak zhrnieme všetky uvedené skutočnosti, je možné konštatovať, že počas analýzy je dôležité dodržiavať všetky pravidlá a odporúčania tak, aby boli získané výsledky čo najpresnejšie a na základe získaných údajov je možné určiť efektívnosť použitej terapie a ďalšiu šancu na úplné uzdravenie.

Kvalitatívna analýza hepatitídy C

8. marec 2017, 12:29 Odborné články: Nová Vladislavovna Izvchikova 0 10,547

Kvalitatívna analýza polymerázovej reťazovej reakcie - PCR pre hepatitídu C určuje prítomnosť alebo neprítomnosť HCV v tele. V laboratórnych podmienkach sa skúma štruktúra RNA, ktorá bude obsahovať vírus. V prípade zistenia vírusu C je potrebné podstúpiť priebeh liečby, pretože zanedbaný stav pečene bude mať vážne následky. Vysokokvalitná PCR sa vykonáva po regenerácii, aby sa potvrdila neprítomnosť protilátok. Menovaný a na bežnú kontrolu. Pri nízkej koncentrácii pôvodcu v krvi nemusí PCR (kvalitatívna) nič detegovať, pretože diagnostický systém má svoje vlastné prahy citlivosti. V prípade počiatočného štádia ochorenia alebo miernej formy sa PCR uskutočňuje ultradiagnostikou na ultracitlivých zariadeniach.

Čo je RNA vírus?

Termín RNA vírusu hepatitídy C (alebo RNA vírusu hepatitídy C) je samotné ochorenie pečene. Vírus C sa viaže na zdravú bunku tela tým, že preniká dovnútra. V priebehu času, sa šíri po celom tele, je potrebné len dostať do krvi. V dôsledku toho patogén preniká do pečene, fúzuje s bunkami a pracuje tvrdo. Pečeňové bunky (hepatocyty) pracujú pod jej vplyvom, prechádzajú zmenami a odumierajú. Čím dlhšie je vírus C v pečeni, tým väčší je počet buniek. Postupom času sa vyvíjajú nebezpečné ochorenia, ktoré vedú k malígnej degenerácii a smrti.

Infekcia pečene týmto typom vírusu sa nemusí prejavovať externe. Po mnoho rokov alebo desaťročí sa infikovaný človek cíti úplne zdravý a iba náhodné vyšetrenie najčastejšie odhaľuje patológiu. Pri darovaní krvi na hepatitídu sa skúma časť reťazca RNA (ribonukleová kyselina), ktorý je súčasťou ľudského génu (DNA). Výsledky laboratórnych testov by sa nemali používať na samoliečbu, pretože ide len o ukazovateľ. Presný obraz a ďalšia diagnóza je lepšie určená lekárom.

Po dokončení: indikácie pre výskum

Pri potvrdení HCV sa uskutoční PCR analýza (polymerázová reťazová reakcia). Štúdie PCR pomáhajú nájsť pôvodcu v štruktúre RNA a predpisujú účinnú liečbu. Menovaný v týchto prípadoch:

  • zistenie príznakov zápalu pečene;
  • skríningové štúdie na prevenciu;
  • vyšetrovanie osôb v kontakte;
  • diagnostika hepatitídy zmiešaného pôvodu (stanovenie hlavného patogénu);
  • stanovenie úrovne reprodukčnej aktivity vírusu v chronickej forme;
  • cirhóza pečene;
  • na určenie účinnosti predpísanej liečby.
Výskum PCR predpisuje lekárovi, aby určil účinnosť priebehu liečby hepatitídy.

Existuje kvalitatívna aj kvantitatívna analýza PCR. Kvantitatívna PCR ukazuje percento RNA s nosičmi vírusu v krvi a kvalitatívne indikuje prítomnosť alebo neprítomnosť vírusu. Pozitívny indikátor kvality (prítomnosť RNA hepatitídy C) tiež vyžaduje kvantitatívny výskum. Vysoká úroveň koncentrácie pôvodcu hepatitídy C je spojená s rizikom jej prenosu, tj infekcie iných. Nízke čísla sú lepšie liečiteľné. Množstvo vírusov RNA v krvi nesúvisí s intenzitou ochorenia. PCR analýza sa tiež vykonáva v prípade terapie interferónom, aby sa stanovilo trvanie a komplexnosť liečebného postupu.

Vlastnosti vysoko kvalitnej PCR analýzy hepatitídy C

Kvalitatívna analýza je priradená ukazovateľovi polymerázovej reťazovej reakcie pre všetkých pacientov, ktorí majú protilátky proti hepatitíde C v krvi, tí, ktorí boli chorí a zotavení, musia znovu podstúpiť test. Odporúča sa vykonať analýzu hepatitídy B, potom v prípade pozitívneho záveru a hepatitídy D. Tiež kvalitatívne analyzovaná reakcia by sa mala vykonať v spojení s inými krvnými testami. Analýzy ukazujú úplný obraz šírenia vírusu.

Z výsledkov testov bude viditeľný alebo negatívny len pozitívny test na hepatitídu C, to znamená prítomnosť alebo neprítomnosť vírusu. Ak je výstup "detegovaný", vírus je a naďalej je aktívny. Označenie "nezistené" označuje neprítomnosť vírusu alebo jeho malého množstva. S týmto indikátorom je potrebné mať na pamäti, že analytická citlivosť diagnostických systémov je odlišná a že RNA hepatitída C môže byť stále v krvi, ale v analýze sa neprejavuje.

Zvlášť citlivá metóda PCR odhalila ultra hepatitídu C aj v malých množstvách. Používa sa fluorescenčná hybridizačná štúdia, ktorá je mnohonásobne vyššia ako štandardné PCR systémy. Metóda sa používa v niekoľkých prípadoch:

  • podozrenie na skryté formy hepatitídy C;
  • PCR diagnostika nepotvrdila patogén, ale sú tu protilátky;
  • v prípade zhodnotenia;
  • odhaliť skorú infekciu.
Späť na obsah

Dekódovacia analýza

Dekódovanie PCR HCV ovplyvňuje konečné rozhodnutie pri stanovení diagnózy, najmä pomocou ultrametodovej metódy. Hlavnou nevýhodou tejto štúdie je prísne dodržiavanie sterilných podmienok pre vzorku a materiály. Mierna odchýlka niekedy ukazuje nepresné analytické závery, komplikuje diagnostiku a následnú liečbu. Analýza PCR na stanovenie RNA hepatitídy nie vždy s istotou ukazuje obraz choroby, niekedy sú dovolené nepresnosti av oboch smeroch.

Pri diagnostike vírusu hepatitídy sa odporúča použiť komplexné vyšetrenie.

Norma ukazovateľov

Neprítomnosť JgM protilátok proti vírusovej hepatitíde C vo výsledkoch štúdie sa považuje za normu v analýze polymerázovej reťazovej reakcie. Zároveň zistenia sérologickej analýzy poukazujú na prítomnosť protilátok proti vírusu C, čo je tiež v normálnom rozsahu. Kvalitatívna definícia neukazuje intenzitu ochorenia, ale iba odhalí pôvodcu hepatitídy C v RNA. Táto analýza sa po spracovaní opakuje, aby sa potvrdila skutočná regenerácia.

odchýlky

Ak sú prítomné JgM protilátky proti HCV RNA, znamená to, že sa vyvíja infekcia. Ochorenie prebieha súčasne akútne alebo chronicky, prejavuje sa v rôznych štádiách. Ak sa zaznamená zníženie počtu protilátok, analýza ukáže, že výsledky liečby sa dosiahli počas zotavenia. Existujú mimoriadne zriedkavé prípady falošne pozitívnych nálezov v diagnostike. Nachádzajú sa u žien počas tehotenstva au ľudí s inými infekčnými chorobami.

Diagnóza s PCR pre hepatitídu C

Nie každý vie, prečo používajú diagnostickú metódu PCR na hepatitídu C. Jednou z najbežnejších skupín chorôb sú infekčné ochorenia gastrointestinálneho traktu. Najčastejšie sú postihnuté žalúdok (vredy), črevá (kolitída, enteritída) a pečeň (hepatitída).

Zo všetkých vyššie uvedených orgánov je najväčšia záťaž na pečeň. V tele je úloha pečene mimoriadne dôležitá:

  1. Takmer všetky metabolické reakcie prebiehajú v pečeni (tu sa vytvárajú všetky typy životne dôležitých zložiek, ktoré umožňujú telu plne fungovať).
  2. Pečeň je hlavným detoxikačným orgánom. S jeho pomocou (najmä žlčou) sa odstráni mnoho substrátov, ktoré môžu spôsobiť intoxikáciu a viesť k vážnym následkom.

Bohužiaľ, veľa ľudí nesleduje svoje zdravie, čo je dôvod, prečo pečeň začína trpieť. Obvykle sa vyvíja hepatitída rôznych etiológií (vírusová, toxická).

Definícia hepatitídy

Vírusová hepatitída zaujíma dôležité miesto medzi ochoreniami pečene. Závažnosť priebehu ochorenia, zložitosť liečby ich zaradili na prvé miesto medzi patológiu inej povahy tohto orgánu.

Všetky hepatitídy sú rozdelené na akútne a chronické. Hepatitída A a B sú klasifikované ako akútne.

Toto ochorenie je spôsobené vírusom hepatitídy C. Charakteristickým znakom je, že ochorenie môže trvať dlho bez akýchkoľvek klinických prejavov.

Prenáša sa hlavne krvou. S prúdom krvi vstupuje vírus do pečene, kde sa vo svojich bunkách začína množiť. V dôsledku akumulácie viriónu dochádza k deštrukcii infikovaného hepatocytu. V reakcii na to sa začínajú vytvárať protilátky, ktoré začínajú napadať zvyšky hepatocytov. Z tohto dôvodu sa v priebehu času vyvinie bazén proti pečeňovým bunkám, čo zhoršuje priebeh ochorenia.

Vzhľadom na to, že choroba je mierna asymptomatická alebo asymptomatická a klinické príznaky sa objavujú len vtedy, keď sú bunky významne ovplyvnené, toto ochorenie si vyžaduje vytvorenie diagnostických metód na zistenie jeho prítomnosti a prijatie vhodných opatrení.

Diagnóza hepatitídy C: kvalitatívne a kvantitatívne analýzy

V súčasnosti sa na diagnostiku hepatitídy C používajú také metódy, ako je biopsia pečene a imunogram.

Umožňujú priamo určiť prítomnosť infikovaných hepatocytov (vzorka biopsie pečene) alebo špecifických protilátok proti postihnutým bunkám (imunogram). Existuje však metóda, ktorá umožňuje spoľahlivo určiť prítomnosť samotného vírusu. Toto je PCR - polymerázová reťazová reakcia.

Podstata tejto metódy spočíva v tom, že za určitých podmienok dochádza k produkcii reťazcov RNA. Je to spôsobené skutočnosťou, že v krvi alebo v predmetnej biopsii sú fragmenty vírusovej častice. Keď sa spoja s niektorými molekulami v médiu, dochádza k syntéze reťazcov komplementárnych k vírusovej RNA. Pri ich následnej analýze a porovnaní so známou nukleotidovou sekvenciou vírusu hepatitídy C je možné určiť, či je vírus prítomný v tele a či je prítomné poškodenie pečene.

PCR sa uskutočňuje po detekcii špecifických protilátok proti vírusu hepatitídy v krvi. Po vykonaní testu sa výsledok „RNA“ deteguje alebo „nezistí“. Príležitostne môže povedať, že „nie je dostatok materiálu“ - v tomto prípade je potrebná opakovaná skúška na hepatitídu C. t

Ak je počet vírusových častíc menší ako požadované minimálne množstvo, potom môžeme povedať, že neexistuje žiadna hepatitída a minimálne množstvo genetického materiálu by mohlo byť „zmätené“ v dôsledku mimikry genetického materiálu alebo niektorých nukleotidových sekvencií, ktoré by sa mohli zhodovať s vírusom.

  1. Pri PCR sa dá pozorovať negatívny výsledok, keď sú v krvi skutočne vírusové častice, ale sú také malé (infekcia sa nedávno objavila alebo pred analýzou predchádzala dlhodobá a intenzívna antivírusová terapia), že testovací systém jednoducho nedokázal určiť svoju koncentráciu normálne. RNA - "nezistená".
  2. Ak má PCR pozitívny výsledok, potom je v krvi toľko vírusových častíc, že ​​ich počet prekračuje dolnú hranicu citlivosti testovacieho systému. V tomto prípade existuje vysoké riziko vzniku infekčného procesu (alebo je už prítomný v pomerne pokročilom štádiu). Zvyčajne je veľké množstvo vírusu už indikáciou na liečbu a následnú transplantáciu pečene.

Niekedy sa test môže stať falošne pozitívnym alebo falošne negatívnym.

Falošne negatívny výsledok PCR hepatitídy sa pozoruje v prípade, keď sú niektoré zložky prítomné v reakčnom médiu, ktoré inhibuje tvorbu kópií vírusovej častice. Z tohto dôvodu nie je možné získať pravdivý obraz o stave krvi, čo prispieva k prechodu vírusu a progresii ochorenia. Prítomnosť heparínu v krvi môže tiež ovplyvniť reakciu (znížením relatívnej viskozity krvi). Nesprávna interpretácia analýzy je možná aj vtedy, keď neboli splnené podmienky prepravy a skladovania skúmaného materiálu.

Falošne pozitívne výsledky, keď je diagnostikovaná hepatitída C, PCR najčastejšie vzniká, keď je skúmavka alebo pracovné prostredie kontaminované. Okrem toho možno pozorovať pozitívne výsledky s prítomnosťou vírusov hepatitídy iných skupín (v dôsledku krížovej reakcie).

Kvalitatívna analýza PCR na detekciu hepatitídy C

Prítomnosť veľkého počtu kryoglobulínov v krvi tiež priamo ovplyvňuje priebeh PCR. Z tohto dôvodu je nevyhnutné určiť ich koncentráciu v krvi pred testovaním na hepatitídu C, aby sa vopred zistilo skreslenie výsledku a zabránilo sa mu.

Po týchto testoch je jasné, či sú v krvi vírusové častice. Pri ich určovaní sa odporúča okamžite začať antivírusovú liečbu, aby sa spomalil priebeh procesu. Na rozdiel od hepatitídy B neexistuje žiadna kompletná liečba hepatitídy C; choroba prechádza len do latentného štádia a začína postupovať pomalšie. Poškodenie pečene je nevyhnutné. V poslednom štádiu procesu, keď sa pečeň už nedokáže vyrovnať s jej funkciou, môže vyžadovať transplantáciu.

Liečba sa uskutočňuje hlavne s dvoma liekmi - interferónom a ribavirínom.

Dokázali svoju účinnosť pri spomaľovaní procesu porážky hepatocytov. Po ceste je nevyhnutne predpísaná infúzna terapia na uľahčenie práce pečene.

Všetci pacienti, u ktorých došlo k zvýšeniu počtu vírusových častíc v krvi, sú nevyhnutne zaregistrovaní u hepatológa. Niekoľkokrát ročne sa odporúča podrobiť sa preventívnemu vyšetreniu, aby sa určil priebeh procesu a včasná detekcia indikácií na transplantáciu. Okrem toho je možné použiť hepatoprotektory, aj keď názory lekárov sa trochu líšia. Niektorí sa domnievajú, že tieto lieky vám umožňujú prerušiť proces a chrániť ešte nenarušené hepatocyty; iní sú presvedčení, že ich nemá zmysel a mala by sa vykonať intenzívna antivírusová liečba.

Hepatitída C teda patrí do kategórie chorôb, ktorých identifikácia predstavuje určité ťažkosti. Zlepšenie diagnostických metód, ako aj včasné preventívne vyšetrenia znížia výskyt tohto ochorenia. Dôležitá je aj prevencia tohto ochorenia. Človek by sa mal opatrne vyhýbať kontaktu s krvou, odmietnuť užívať drogy, až potom bude táto choroba odstránená. Hlavnou vecou v prevencii a liečbe je vedomý postoj pacienta k ich zdraviu.

Vykonanie PCR analýzy hepatitídy C a dekódovanie výsledkov

Analýza PCR hepatitídy C je štúdia, ktorej hlavným účelom je identifikovať genetický materiál pôvodcu. Analýza odhalila pôvodcu ochorenia pomocou polymerázovej reťazovej reakcie. Táto diagnóza má vysoký stupeň presnosti, špecifickosti na detekciu neprítomnosti alebo prítomnosti vírusovej infekcie.

Podstata diagnózy

Aby sa uskutočnila PCR analýza na stanovenie vírusu hepatitídy C od pacienta, odoberie sa venózna krv, ktorá potenciálne obsahuje HCV (ribonukleová kyselina) požadovaného vírusu.

Test PCR na hepatitídu C zahŕňa postup pridania do krvných častíc pacienta:

  • priméry (krátke umelo syntetizované oblasti potrebného génu);
  • špeciálny enzým (RNA polymeráza).

Po odbere vzoriek sa biologický materiál posiela na výskum do laboratória. Jedna časť krvi je potrebná na priamu PCR analýzu, druhá na testovanie pomocou ELISA. Enzým je schopný v krátkom čase zvýšiť počet genetického materiálu vírusu patogénu. V špeciálnom zariadení sa vykonáva niekoľko cyklov tepelných a chladiacich procesov. V poslednom štádiu sa získaný materiál porovná s génmi vírusu a urobí sa záver o prítomnosti alebo neprítomnosti patológie v tele pacienta.

Podstata a priebeh PCR analýzy v laboratóriu. Natočené SiberianMedicalLaboratory.

Typy výskumu

Existujú 3 typy diagnostiky, ktoré umožňujú určiť prítomnosť vírusu hepatitídy C v ľudskom tele:

  • genotypu;
  • kvalita;
  • kvantitatívne.

Kvalitatívna metóda

Diagnóza hepatitídy C s kvalitatívnou metódou je použiteľná u pacientov, u ktorých sa v krvnom teste detegujú protilátky proti vírusu. V prípade prítomnosti akútnej fázy HCV RNA takéto diagnostické opatrenia môžu určiť prítomnosť ochorenia v priebehu 1-2 týždňov po infekcii. Počas tohto obdobia sa ešte nemusia vyvinúť protilátky proti hepatitíde C.

Kvantitatívna metóda

Na stanovenie koncentrácie vírusu vo vzorkách krvi sa používa kvantitatívna diagnostická metóda. Takýto test na virémiu (stupeň koncentrácie) umožňuje presne určiť počet jednotiek vírusovej RNA. Konečný výsledok je vyjadrený v príslušnom objeme. Ak hovoríme o kvantitatívnej analýze, potom sa indikátory merajú v 1 ml (1 m 3).

Parameter vírusovej záťaže znamená úroveň infekčnosti ochorenia, to znamená, že odráža stupeň "infekčnosti" pacienta. V praxi to znamená, že čím vyššia je koncentrácia vírusu v krvi, tým väčšia je šanca pre pacienta infikovať iných hepatitídou C. Kvantitatívna výskumná metóda vám tiež umožňuje stanoviť kvalitu a účinnosť liečby.

genotypu

Genotypizácia odhalila mutácie pôvodcu ochorenia. Pred predpísaním plánu liečby sa stanoví genotyp vírusu: závisí od neho kvalita a trvanie liečby. Napríklad pri liečení ochorenia typu I je účinnosť 60%, v prípade typu II, typu III - približne 80%.

Výhody analýzy hepatitídy PCR

Medzi hlavné výhody postupu patrí:

  1. Možnosť včasnej diagnostiky. PCR analýza je schopná detekovať prítomnosť vírusu v skorých štádiách infekcie.
  2. Nízke výsledky chýb. Študovaný biologický zdroj vám umožňuje diagnostikovať časť genetického materiálu, ktorá je charakteristická len pre jeden typ vírusovej infekcie. Táto okolnosť umožňuje zabrániť falošným diagnostickým výsledkom.
  3. Vysoká citlivosť. PCR analýza je schopná detekovať RNA vírusu v malých množstvách, čo tiež umožňuje sledovať latentné infekcie v čase.

Indikácie pre

Testovanie na PCR na hepatitídu C je nevyhnutné, ak je k dispozícii:

  • kontakt s chorými ľuďmi, čo by mohlo viesť k infekcii;
  • príznaky cirhózy pečene (zväčšenie sleziny, nezvyčajné zmeny veľkosti pečene, detekcia venózneho plexu na bruchu pod kožou);
  • pozitívne výsledky ELISA;
  • zvýšená aktivita AST a ALT (prejavuje sa biochemickou analýzou krvi);
  • potreba kontroly správania antivírusovej terapie;
  • počiatočné štádium liečby pre potrebu stanoviť vírusovú záťaž;
  • vykonanie poslednej fázy terapie na vylúčenie možných opakovaní;
  • pacient má hepatitídu B na vylúčenie vzniku zmiešaného poškodenia pečene.

Ako sa pripraviť na darovanie krvi pre výskum PCR

Príprava na PCR analýzu zahŕňa nasledujúce odporúčania:

  • krv sa odoberá ráno;
  • analýza sa vykonáva na lačný žalúdok, preto sa odporúča prestávka medzi posledným príjmom potravy 8 až 10 hodín;
  • niekoľko dní pred diagnózou by mali byť vylúčené mastné, korenené a vyprážané potraviny, alkoholické nápoje a fajčenie;
  • jeden deň pred analýzou sa treba zdržať ťažkej fyzickej námahy, vylúčiť triedy v telocvični alebo bazéne.

Výsledky analýzy: normy a odchýlky

Samotná analýza nie je dlhodobá a vysoko kvalifikovaný špecialista na hepatológ alebo infekčné ochorenie dešifruje výsledky PCR na hepatitídu C. Na základe výsledkov analýzy je pacient diagnostikovaný.

S cieľom správne dešifrovať výsledky prieskumu sa zohľadňujú tieto ukazovatele: t

  • biochemická analýza krvi;
  • ultrazvukové dáta;
  • výsledky biopsie.

Interpretácia kvantitatívnej analýzy

Pri získavaní výsledkov kvantitatívnej analýzy PCR sa zohľadňujú tieto ukazovatele: t

Metóda PCR na detekciu hepatitídy C

PCR je polymerázová reťazová reakcia, ktorá sa používa na stanovenie prítomnosti hepatitídy C v sére, výsledok môže byť pozitívny aj negatívny.

Výhody metódy PCR

Táto diagnostická metóda má nasledujúce výhody:

  1. Metóda PCR umožňuje stanoviť nasledujúce výsledky:
    • prítomnosť vírusu RNA;
    • stupeň žiarenia;
    • pôvodná genetická informácia;
    • jedinečnosť a jedinečnosť genetických údajov.
  2. Môžete použiť akýkoľvek potrebný klinický materiál:
    • krvi;
    • plazmy;
    • moč;
    • telové tekutiny a výlučky;
    • sputum a ďalšie.
  3. Umožňuje určiť v krvi viac ako jeden mikroorganizmus naraz, na rozdiel od iných vzoriek.
  4. Získanie výsledkov do 24 hodín.
  5. Zjednodušené metódy skladovania a transportnej analýzy, patogény sú určené aj v mŕtvom prostredí.
  6. Jedinečnosť PCR umožňuje identifikovať určité mikroorganizmy, ktoré nie sú prístupné žiadnej inej vzorke.
  7. Vysoký stupeň citlivosti reagencií, test je najpresnejší svojho druhu.

Vlastnosti kvalitatívnej analýzy PCR

Uskutočňuje sa kvalitatívny test na zistenie prítomnosti vírusu v krvi a na získanie negatívneho alebo pozitívneho výsledku.

Indikáciou tohto typu diagnózy je detekcia protilátok proti hepatitíde C v tele pacienta.

Možné výsledky:

  • zistené (pozitívne);
  • nezistené (negatívne).

Test kvality nie je vhodný pre pacientov s veľmi nízkym obsahom vírusu v krvi, takže má určitú citlivosť.

Výsledok "zistený"

Detekcia vírusu hepatitídy C môže byť niekoľko týždňov po infekcii tela, dokonca aj v neprítomnosti protilátok proti tomuto patogénu. Tento výsledok poukazuje na prítomnosť fragmentu RNA charakteristického pre hepatitídu C v tele a krvnej skupine.

Pacient sa považuje za infikovaného týmto vírusom a podlieha ďalšiemu šíreniu patogénnych buniek v tele.

Výsledok „nebol nájdený“

Táto možnosť naznačuje, že vo vzorke biologického materiálu, ktorý je predmetom štúdie, nie sú žiadne RNA fragmenty špecifické pre hepatitídu C. To je negatívny výsledok.

Citlivosť testu neodhaľuje nízky obsah fragmentov RNA, takže výsledok „nezistený“ nie je vždy hodnoverný.

Vlastnosti interpretácie výsledkov

Hlavnou črtou interpretácie výsledkov je prahová citlivosť metódy PCR.

Závisí od nasledujúcich ukazovateľov:

  • presnosť štúdie;
  • typ a kvalita použitého zariadenia.

Je potrebné poznamenať, že citlivosť sa môže pohybovať medzi 10-500 IU / ml. Z toho vyplýva, že ak je vírus prítomný v tele študovaného pacienta v koncentrácii nižšej ako 10 IU / ml, test ukáže výsledok „nezistený“. To však neznamená, že patogén je úplne neprítomný.

Varianty diagnostických systémov

V súčasnosti existujú nasledujúce možnosti diagnostických systémov:

  1. Ak sa odoberie krv pacientovi podstupujúcemu antivírusovú liečbu, majú sa použiť diagnostické systémy s citlivosťou najmenej 50 IU / ml. Na tento účel sa používajú tieto analyzátory:
    • Cobas Ampicolor HCV-Test;
    • RealBest HCV RNA.
  2. Aby bola definitívna diagnóza "hepatitídy C", je potrebné detekovať RNA vírus v troch rôznych vzorkách biologického materiálu. Tieto odporúčania vypracovala Svetová zdravotnícka organizácia. Ak je výsledok trikrát negatívny, diagnóza sa nepotvrdí.
  3. V súčasnosti je okrem PCR metódy k dispozícii presnejší test nazývaný TMA (transkripčná amplifikačná metóda). Jeho prah citlivosti je omnoho vyšší ako v iných diagnostických metódach.

Rozsah detekovaných vírusových modifikácií

V tomto štádiu vývoja genetiky je známych niekoľko typov a variantov modifikácie vírusu.

Laboratórna diagnostika v našej krajine s absolútnou presnosťou môže určiť nasledujúce genotypy:

Vlastnosti kvantitatívnej analýzy PCR

Kvantitatívna analýza je definícia vírusu hepatitídy C v ľudskom tele. Počas štúdie sa pomocou PCR určila RNA a vírusová záťaž vo východiskovom materiáli. Inak môžeme povedať, že test vám umožňuje určiť, koľko vírusových buniek je v biologickej tekutine. Pre tento typ štúdie sa používa iba venózna krv. Neexistuje žiadny špecifický testovací prípravok.

Kvantitatívna analýza vám umožňuje monitorovať už začatú fázu liečby a vyhodnotiť jej účinnosť. Na vyhodnotenie sa údaje z testov vykonajú pred a počas terapeutických zákrokov. Pomocou získaných výsledkov je možné predpovedať priebeh ochorenia.

S úspechom zvoleného spôsobu liečby po 3 mesiacoch by sa množstvo RNA malo niekoľkokrát znižovať. Podľa odporúčaní sa kvantitatívna analýza vykonáva po jednej, potom po troch a šiestich mesiacoch. Posledný výsledok s úspechom liečby by mal byť negatívny.

Vyhodnotenie výsledkov kvantitatívneho testu PCR

V našej krajine existujú 2 možnosti hodnotenia výsledku kvantitatívneho testu PCR:

  • počet kópií biologickej tekutiny na mililiter;
  • počet medzinárodných jednotiek na mililiter.

Ak chcete získať medzinárodné jednotky, počet kópií sa vydelí číslom 4.

  • vysoká s PCR nad 800 000 IU / ml;
  • nízka s PCR pod 400 000 IU / ml.

Výsledok kvantitatívneho testu poskytuje 2 možnosti:

  • "Pod meracím rozsahom";
  • "Nezistené" (negatívne).

Hodnotenie: „pod meracím rozsahom“

Takýto záver je urobený, keď kvantitatívny test RNA nezistil pôvodcu hepatitídy C v materiáli bunkového zdroja, ale vírus je stále prítomný v krvi. Spoľahlivosť analýzy je potvrdená kvalitatívnou metódou, pretože prah citlivosti kvantitatívneho testu nemusí detekovať malé hodnoty a koncentrácie patogénu.

Hodnotenie: "nezistené"

Takýto záver sa robí vtedy, keď sa počas diagnostiky v zdrojovom materiáli nezistili RNA vírusy hepatitídy C. To je negatívny výsledok.

Interpretácia výsledkov analýzy kvantitatívneho testu PCR

Použitie indikátora vírusovej záťaže určuje:

  • stupeň zanedbávania choroby;
  • ako infekčný je pacient;
  • účinnosti antivírusovej terapie.

Čím vyššia je miera výskytu vírusu hepatitídy C v tele, tým je pacient nebezpečnejší pre iných ľudí a čím progresívnejší je jeho choroba.

PCR hepatitídy C je dôležitá diagnostická metóda, najmä počas terapeutických zákrokov. Vďaka získaným negatívnym alebo pozitívnym výsledkom je možné vyhodnotiť ich účinnosť, úplne vyliečiť pacienta alebo skrátiť dobu liečby.

PCR analýza pre hepatitídu C

Na diagnostiku "chronickej vírusovej hepatitídy C (CVHS)" je potrebné komplexné vyšetrenie osoby, ktorá zahŕňa klinické, laboratórne a inštrumentálne štúdie. Z hľadiska diagnózy pre správnu diagnózu je dôležitá metóda PCR - polymerázová reťazová reakcia.

Čo táto analýza ukazuje a prečo je potrebná?

Táto laboratórna metóda detekuje RNA vírusu hepatitídy C v ľudskej krvi. Spolu s enzýmovou imunoanalýzou (ELISA) na protilátky proti vírusu sa používa PCR na stanovenie diagnózy CVHC a jeho genotypu patogénu. Tento výskum je jednou z najnovších metód laboratórnej diagnostiky. Jeho spoľahlivosť pri CVHS prevyšuje 97%, čo sa považuje za veľmi dobrý ukazovateľ výskumu.

Existujú tri PCR krvné testy na CVHS: kvalitatívne, kvantitatívne a vírusové genotypovanie. Prvá štúdia (kvalitatívna analýza) vírusu ho deteguje v krvi, a preto sa používa len na diagnostiku.

Druhá (kvantitatívna) štúdia určuje stupeň vírusovej záťaže na tele, preto sa používa na monitorovanie účinnosti liečby.

Tretia PCR (genotypizácia) objasňuje diagnózu a stanovuje genotyp vírusu, ktorý je veľmi dôležitý pre určenie správnej antivírusovej liečby.

Podstatou techniky polymerázovej reťazovej reakcie je použitie enzýmov, ktoré znásobujú genetický materiál patogénu v biomateriáli. V procese takejto replikácie sa skúmavka s krvou niekoľkokrát zahrieva a ochladí na teplotu potrebnú na urýchlenie enzymatickej reakcie. V dôsledku týchto manipulácií sa množstvo vírusového genómu mnohokrát zvyšuje, čo umožňuje jeho detekciu aj pri minimálnom množstve.

PCR diagnostika má mnoho výhod oproti iným laboratórnym testom:

  • vysoká citlivosť - 97-98%;
  • zaručená analytická špecifickosť (odhaľuje presne patogén, ktorý chcete nájsť, a nie jeho príbuzný kmeň);
  • rýchlosť vedenia (nie je to viac ako 2 dni, aby sme dospeli k záveru).

Tri typy PCR testov

Vysoko kvalitná PCR analýza je priradená všetkým pacientom, u ktorých analýza ELISA detegovala protilátky proti vírusu HVGS. Po vykonaní vysoko kvalitnej PCR je možné získať dve možnosti odpovede: "RNA je detekovaná" alebo "RNA nie je detekovaná." Na zistenie minimálneho množstva vírusu v krvi sú potrebné testovacie systémy s citlivosťou najmenej 50 IU / ml. Ak je koncentrácia vírusu v krvi pacienta nižšia, ako môže určiť diagnostika, výsledok štúdie môže byť falošne negatívny. Aby sa zabránilo takejto diagnostickej chybe, laboratóriá vykonávajúce PCR diagnostiku by mali byť vybavené vysoko citlivými testovacími systémami. V laboratóriu "Invitro" sa používajú napríklad testy s citlivosťou 15 IU / ml. Laboratórni pracovníci sú povinní poskytnúť pacientom a lekárom informácie o citlivosti testov na základe ich prvej žiadosti.

Kvantitatívna analýza PCR určuje stupeň virémie, to znamená koncentrácie patogénu v krvi, vírusovej záťaže. Výsledok tejto štúdie, na rozdiel od vysoko kvalitnej PCR, je vyjadrený v počtoch, napríklad 2 x 10 x 6 IU / ml, čo znamená 2 milióny medzinárodných jednotiek v 1 ml krvi. Niektoré laboratóriá používajú iný indikátor - počet kópií / ml. Tieto dva ukazovatele sa ľahko konvertujú: 1 medzinárodná jednotka sa rovná 4 kópiám RNA. Teda 2 x 10 x 6 IU / ml bude znamenať, že 8 x 10 x 6 kópií vírusovej RNA v 1 ml, t.j. 8 miliónov kópií v 1 ml krvi.

Genotypizácia je definícia jedného zo šiestich genotypov vírusu. Klinický obraz, rýchlosť vývoja komplikácií pečene a prognóza budúceho života pacienta závisia od genotypu pôvodcu. Genotyp vírusu je veľmi dôležitý už v štádiu diagnózy, pretože kombinácia liečiv a trvanie terapeutického postupu určeného pacientovi závisí od jeho správneho určenia.

Avšak aj tento zdanlivo „dokonalý“ laboratórny výskum má svoje nevýhody:

  • štúdia replikuje genetický materiál všetkých patogénov, dokonca aj neživých, ktorý môže skresliť výsledok. Preto, aby sa sledovala účinnosť pomocou PCR, re-analýza sa vykonáva najskôr 2 mesiace po predchádzajúcom, takže mŕtve vírusy môžu „opustiť“ organizmus pacienta;
  • časť vírusového genómu, ktorá sa stanoví pomocou testovacích systémov, môže byť teoreticky prítomná v iných vírusoch alebo mikroorganizmoch, takže existuje možnosť falošne pozitívnej reakcie;
  • vírusy rýchlo mutujú. Niekedy je rýchlosť a rozsah vírusovej mutácie taký vysoký, že testovací systém prestane zachytávať svoj genóm. V dôsledku toho je možný falošne negatívny výsledok.

Na vyrovnanie týchto nedostatkov výrobcovia laboratórnych testovacích systémov pre diagnostiku PCR neustále vykonávajú svoje testy vrátane krížových reakcií a citlivosti na konkrétny genotyp vírusu.

Ako urobiť PCR test na hepatitídu C?

Aby bol záver vyšetrenia PCR spoľahlivý, je potrebné striktne dodržiavať pravidlá jeho prípravy:

  • štúdia sa vykonáva nalačno (glukóza, tuky, minerály, ktoré sa dostávajú do krvi z potravy, môže ovplyvniť rýchlosť a kvalitu enzýmovej reakcie);
  • medzera medzi posledným jedlom a odberom krvi na analýzu by mala byť najmenej 8 hodín;
  • v predvečer štúdie je zakázané konzumovať alkohol a konzumovať tučné jedlá, ktorých doba eliminácie sa predlžuje;
  • deň pred odchodom do laboratória by sa mali vyvarovať silného fyzického a emocionálneho stresu;
  • do času odberu krvi sa neodporúča fajčiť.

Aby sa predišlo vzniku falošných záverov, údajný pacient musí prísť do laboratória o niečo skôr ako krv. Trvá 15-20 minút, kým človek chytí dych, upokojí sa. Adrenalín, ktorý je prítomný v krvi po rýchlej chôdzi, môže ovplyvniť výsledok vyšetrenia.

Ak pacient uvedený na analýzu vezme nejaké lieky, mal by o tom informovať lekára. Je možné, že niektoré z nich budú musieť byť na určitý čas odmietnuté (ak je to možné).

Výsledok analýzy PCR na hepatitídu C

Dekódovanie výsledkov laboratórneho lekára laboratória, ktoré vykonalo analýzu. Dekódovanie je určenie odchýlky výsledku získaného z normy. Rýchlosť ukazovateľov stanovuje priamo výrobca testovacieho systému, ktorý laboratórium používa na diagnostiku. Preto nie je prekvapujúce, že v niektorých laboratóriách je vírusová záťaž stanovená v IU / ml a v iných v kópiách / ml.

Po získaní záveru je potrebné, aby sme ho mohli správne interpretovať. Ošetrenie výsledkov štúdie by mal vykonať ošetrujúci lekár pacienta s hepatitídou C. Lekár môže po objektívnom, inštrumentálnom a laboratórnom vyšetrení pacienta získať dostatočné množstvo údajov na správnu interpretáciu získaných výsledkov PCR.

Hodnotenie kvalitatívnej analýzy spravidla nespôsobuje ťažkosti ani u pacientov. Výsledkom môže byť iba jeden: "detekovaný" alebo "nezistený". V tomto prípade je druhá z nich normou.

Ukazovatele kvantitatívnej analýzy je zložitejšie interpretovať. Ukazuje stupeň vírusovej záťaže pacienta. Ani medzi hepatológmi neexistuje konsenzus o tom, ako liečiť zistenú virémiu. Väčšina lekárov má sklon veriť, že by sa malo zvážiť vysoké zaťaženie viac ako 8 × 10 * 5 IU / ml. Zaťaženie viac ako 1 x 10 x 7 IU / ml sa považuje za veľmi vysoké, zatiaľ čo nízke zaťaženie je menšie ako 4 × 10 x 5 IU / ml.

Stupeň vírusovej záťaže indikuje virulenciu (agresivitu) vírusu: čím väčšie je jeho množstvo v krvi, tým rýchlejšie sa môžu vyvinúť komplikácie pečene. Vysoká koncentrácia vírusu v krvi tehotnej ženy zvyšuje pravdepodobnosť jeho preniknutia cez hemato-placentárnu bariéru k plodu. Virémia tiež ovplyvňuje účinnosť liečby: pri nízkych počtoch je účinnosť liečby vyššia ako u vysokých.

Aby sme boli presvedčení o presnosti analýzy PCR pre hepatitídu C, je potrebné uprednostniť len tie laboratóriá, ktoré sú dobre overené. Cenová politika by v tomto prípade nemala zohrávať primárnu úlohu.

Štúdia PCR o hepatitíde C: typy, indikácie, transkript

Vírusová hepatitída C je závažné ochorenie, ktoré sa vyskytuje pri poškodení pečene. U osemdesiatich percent pacientov sa stáva chronickým. Vírus sa množí v pečeňových bunkách - hepatocytoch - a spôsobuje ich smrť. Mŕtve tkanivo je nahradené ohniskami spojivového tkaniva, vyvíja sa fibróza.

Ako sa vyvíja fibróza, pečeň nie je schopná vykonávať svoje funkcie, začína sa cirhóza pečene, čo je nebezpečné pre jej komplikácie: zvýšený tlak v systéme portálnej žily, gastrointestinálne krvácanie, zhoršená zrážanlivosť krvi, mentálne zmeny spôsobené poškodením jadier mozgu toxickými produktmi.

Príčinou ochorenia je infekcia vírusom z čeľade Flaviviridae, ktorá patrí do typu RNA vírusov. To znamená, že genetický materiál, ktorým sa syntetizujú proteíny patogénu, je kódovaný v molekule ribonukleovej kyseliny. K infekcii dochádza krvou, pohlavne a tehotnou ženou na plod. Bohužiaľ, dostatočne veľké množstvo času môže prejsť medzi infekciou a začiatkom produkcie protilátok - od dvoch týždňov do šiestich mesiacov. To neumožňuje stanoviť infekciu pomocou ELISA a začať liečbu v počiatočnom štádiu.

Čo je to analýza PCR?

PCR je metóda molekulárnej analýzy, ktorá umožňuje detekciu genetického materiálu patogénu už v prvom týždni po infekcii pomocou polymerázovej reťazovej reakcie. Štúdia má vysokú špecifickosť, presnosť a umožňuje nielen určiť prítomnosť alebo neprítomnosť vírusu, ale aj jeho koncentráciu a genotyp.

V štúdii sa odoberá pacientova krv, v ktorej sa môže nachádzať vírusová RNA. Primery sa pridávajú do krvi - umelo syntetizované oblasti požadovaného génu malej dĺžky a RNA polymeráza je špeciálny enzým, ktorý opakovane zvyšuje množstvo genetického materiálu patogénu. Pomocou špeciálneho zariadenia sa vykonáva niekoľko cyklov ohrevu a chladenia. Potom sa materiál analyzuje a porovnáva so známymi génmi vírusu, na základe ktorého sa robí záver o prítomnosti alebo neprítomnosti infekcie.

Typy PCR analýzy hepatitídy C

Existujú tri typy PCR analýzy:

    Kvalitatívna analýza PCR. Prvá fáza štúdie. To vám umožní identifikovať genetický materiál vírusu v krvi.

Kvantitatívna analýza PCR. Umožňuje určiť vírusovú záťaž - koncentráciu genetického materiálu patogénu v jednom mililitri krvi. Táto štúdia sa vykonáva pred začiatkom liečby a potom v prvej, štvrtej, dvanástej a (ak je dlhý priebeh) dvadsiateho štvrtého týždňa liečby, aby sa vyhodnotila jej účinnosť.

  • Genotypizácia. Kauzálny agens hepatitídy C často a rýchlo mutuje. Na planéte sa našlo sedem variantov tohto genotypu vírusu. V Rusku je spoločný prvý, druhý a tretí typ. Každý z genotypov má odlišnú rezistenciu voči terapii, napríklad účinnosť liečby prvého typu je šesťdesiat percent a pre druhé a tretie toto číslo dosahuje osemdesiatpäť. Preto, aby bolo možné vybrať vhodné liečivá a predpísať liečebný cyklus s dostatočným trvaním, je potrebné presne určiť, aký typ vírusu je pacient infikovaný.
  • Indikácie pre PCR analýzu hepatitídy C

    Štúdia PCR je predpísaná v nasledujúcich prípadoch:

    • kontakt s chorou osobou, u ktorej by sa mohla vyskytnúť infekcia;
    • pozitívny enzýmový imunotest;
    • príznaky cirhózy pečene: zmena veľkosti pečene, zväčšenej sleziny, výskyt subkutánneho venózneho plexu na bruchu;
    • výskyt príznakov poškodenia pečene: bolesť v pravom bruchu, žltnutie kože;
    • zvýšená aktivita ALT a AST v biochemickej analýze krvi;
    • pred začiatkom liečby na stanovenie vírusovej záťaže;
    • monitorovať účinnosť antivírusovej terapie;
    • po liečbe na kontrolu relapsu;
    • v prítomnosti diagnostikovanej hepatitídy B, aby sa vylúčilo zmiešané poškodenie pečene.

    Vysvetlenie PCR štúdií o hepatitíde C

    Dekódovanie PCR analýzy a enzýmového imunotestu na hepatitídu C by mal vykonávať špecialista na hepatológ alebo infekčné ochorenia. Analýza výsledkov PCR je nevyhnutná v kombinácii s údajmi biochemickej analýzy krvi, biopsie a ultrazvuku. Iba kvalifikovaný lekár bude schopný analyzovať výsledky výskumu a na základe nich predpísať správnu liečbu.

    Dekódovanie kvalitatívnej analýzy.

    V analyzovanom biologickom materiáli sa našiel genetický materiál patogénu. Potvrdenie infekcie.

    Infekcia je neprítomná alebo je množstvo patogénu RNA pod hranicou citlivosti.

    Dekódovanie kvantitatívnej analýzy.

    Bežná sadzba pre zdravých ľudí. To znamená, že testovaný materiál neobsahuje RNA hepatitídy C alebo jeho koncentrácia je pod prahom citlivosti štúdie.

    Koncentrácia RNA je pod rozsahom kvantifikácie. Tieto výsledky sa interpretujú veľmi starostlivo, korešpondujú s údajmi z iných štúdií, často sa prehodnocujú.

    Hladina vírusovej záťaže pri danej koncentrácii sa považuje za nízku. Zníženie množstva vírusu zvyčajne znamená, že liečba je úspešná.

    Viac ako 8 x 10 5 IU / ml

    Hladina vírusovej záťaže pri danej koncentrácii sa považuje za vysokú.

    Viac ako 2,4 x 10 7 IU / ml

    Množstvo RNA je nad hornou hranicou rozsahu kvantifikácie. S týmto výsledkom nie je možné vyvodiť závery o stupni vírusovej záťaže. Zvyčajne sa v takýchto prípadoch test opakuje so zriedením vzorky krvi.

    Dekódovanie genotypovania.

    Detekovaná RNA špecifického genotypu

    V biomateriáli sa detegoval vírus hepatitídy C určitého genotypu a subtypu. Výsledok je kódovaný rímskymi číslicami a latinskými písmenami, napríklad - 1a, 2b. Celkovo existuje sedem genotypov a šesťdesiatsedem podtypov, ale v Rusku sú len tri prvé typy.

    Zistená RNA RNA vírusu hepatitídy C

    RNA bola nájdená v krvi vzácneho genotypu pre Rusko, čo nemožno pripísať prvému, druhému alebo tretiemu typu. Je potrebný ďalší výskum.

    Tento výsledok naznačuje, že pacient je zdravý, alebo že množstvo RNA patogénu je príliš malé.

    Je možné, že analýza PCR na hepatitídu C je negatívna a enzýmová imunosorbentná skúška rozpoznáva protilátky proti vírusu. To znamená, že pacient mal akútnu hepatitídu C a zotavil sa sám. Približne dvadsať prípadov infekcie vedie k spontánnemu uzdraveniu, ak má telo pacienta dostatočnú odolnosť voči infekcii.

    Hoci je PCR vysoko presná, jej výsledky môžu byť skreslené v nasledujúcich situáciách:

    • krv bola transportovaná do laboratória v nevhodných podmienkach, teplota bola porušená;
    • vzorka biomateriálu bola kontaminovaná;
    • v krvi boli zvyškové stopy heparínu a iných antikoagulancií;
    • Zistilo sa, že výskumníci sú inhibítory - látky, ktoré spomaľujú alebo zastavujú polymerázovú reťazovú reakciu.

    Výhody PCR oproti iným metódam

      Diagnóza v počiatočných štádiách. PCR deteguje genetický materiál pôvodcu. Pomocou imunofluorescenčnej analýzy možno identifikovať iba imunoglobulíny - látky, ktoré telo produkuje ako odpoveď na infekciu. V prípade infekcie hepatitídy C môže byť rozdiel medzi infekciou a nástupom imunitnej odpovede niekoľko týždňov a mesiacov, v tomto čase bude ELISA neúčinná. PCR poskytne odpoveď v prvom týždni po infekcii.

    Nízka pravdepodobnosť chyby. V skúmanom materiáli určte oblasť genetického materiálu, ktorá je charakteristická len pre jeden typ patogénov. Tým sa eliminujú falošné výsledky. Keď sú možné chyby ELISA, pretože rovnaký typ protilátky sa môže uvoľniť proti rôznym vírusom - takéto protilátky sa nazývajú krížové protilátky.

  • Vysoká citlivosť. PCR umožňuje detekciu RNA kauzatívnej látky aj v minimálnych množstvách. To umožňuje identifikovať skryté infekcie.
  • Ako sa pripraviť na darovanie krvi pre výskum PCR

    Na PCR analýzu hepatitídy C sa odoberá venózna krv. Z pacientovej žily sa zvyčajne odoberajú dve dávky krvi: prvá sa odošle na PCR a druhá pomocou ELISA. To sa robí s cieľom presnejšie posúdiť, koľko je pacient infikovaný vírusom a ako proti nemu bojuje.

    Pacient je zvyčajne povinný dodržiavať nasledujúce pravidlá:

    • krvný test sa odoberá ráno;
    • Interval medzi posledným jedlom a odberom krvi by mal byť osem až desať hodín;
    • dva alebo tri dni pred analýzou je potrebné opustiť vyprážané a mastné jedlá a alkohol;
    • dvadsaťštyri hodín pred analýzou by sa mal pacient vyvarovať fyzickej námahy: neprenášajte závažia, nechodte do posilňovne alebo do bazéna.