PCR hepatitídy B

Dostupnosť moderných liekov proti hepatitíde B (HBV) s jasnými indikáciami na ich podávanie si vyžaduje presné a rýchle overenie diagnózy. Kvôli nedostatočným klinickým údajom v prvých týždňoch ochorenia a obmedzeným analytickým metódam imunotestu sa však rýchlosť diagnózy znižuje.

Prítomnosť markerov anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe vám umožňuje potvrdiť HBV alebo stanoviť skutočnosť predchádzajúceho ochorenia. Je však možné určiť prítomnosť aktívnych vírusových častíc v krvi a ich počet v čase štúdie pomocou PCR - kvantitatívny real-time test na detekciu hepatitídy B. Metóda, v porovnaní s diagnostickými metódami ELISA, rieši diagnostické problémy a umožňuje predpovedať priebeh ochorenia počas prijímania. antivírusové lieky.

Základy diagnostiky chorôb

Diagnóza hepatitídy B je založená na hodnotení klinických prejavov, enzýmových imunotestov a inštrumentálnych metód výskumu. Ochorenie prebieha v akútnej fáze po inkubačnej dobe a v závislosti od dávky infekcie a účinnosti liečby vstupuje do chronického štádia. Hlavným cieľom liečby je zabrániť chronizácii, to znamená eliminácii všetkých vírusových častíc z krvi. Klinický priebeh ochorenia je liek bez následnej virémie.

Skutočnosť eliminácie infekcie sa musí preukázať kvantitatívnou metódou výskumu.

Keďže akýkoľvek kvalitatívny enzýmový imunoanalýzu umožňuje diagnostikovať HBV nepriamo, to znamená, že nevykazuje prítomnosť patogénu vo vnútornom prostredí tela, ale charakterizuje imunitnú reakciu na infekciu, sledovanie účinnosti liečby a fakt, že liečba sa ťažko dokazuje. Preto by mal byť pacient s hepatitídou B alebo s prítomnosťou diagnostických kritérií v jeho prospech vykonaný polymerázovou reťazovou reakciou, aby sa kvantifikoval počet vírusových častíc v krvi. Diagnostická frekvencia je nedostatok kópií DNA infekcie.

Opis diagnostickej metódy

Vysoko citlivá metóda PCR diagnostiky hepatitídy B patrí do kategórie geneticky modifikovaných molekulárno-biologických štúdií. Cez to je určené množstvom vírusovej DNA v biologickom materiále pacienta a prípustnou rýchlosťou. Podľa získaných výsledkov sa stanoví počet vírusových častíc na jednotku objemu. Materiál pre diagnostický test je venózna krv pacienta. Príjem je žiaduci na prázdny žalúdok kvôli možnému účinku chyle séra na výsledok štúdie.

Získané výsledky musia byť poskytnuté lekárovi na interpretáciu a určenie ďalšej taktiky. Nezávislé dekódovanie nepredstavuje diagnostickú hodnotu.

Významnosť výsledku počtu vírusových častíc získaných metódou PCR presahuje hodnotu enzýmových imunotestov. Keďže analýza v reálnom čase ukazuje prítomnosť pôvodcu ochorenia v krvi, jeho informačný obsah je vyšší ako ostatné. Ak ELISA indikuje iba prítomnosť protilátok, ktoré sú pozorované od 4 týždňov inkubačnej doby a trvajú viac ako 8 týždňov po eliminácii vírusu z krvi, potom polymerázová reťazová reakcia jasne potvrdzuje aktívny priebeh ochorenia alebo jeho vyliečenie, charakterizuje dynamiku predpísanej liečby.

Polymerázová reťazová reakcia s kvantitatívnym stanovením častíc patogénov rieši diagnostické otázky v prospech zastavenia liečby z dôvodu zotavenia alebo pokračujúcej liečby z dôvodu jej nedostatočnej účinnosti. Metóda je pre vírus HBV čo najšpecifickejšia a vyznačuje sa prijateľnou chybou.

Indikácie a výkonnostné ciele

Kvantitatívna analýza hepatitídy B je najspoľahlivejšia a umožňuje potvrdiť údaje získané metódami ELISA. Je menovaný, keď:

  1. získanie pozitívneho diagnostického výsledku ELISA;
  2. liečenie pacienta so stanovenou diagnózou poškodenia vírusovej pečene;
  3. pri diagnostike zmiešanej etiológie hepatitídy;
  4. v prípade potreby stanovte vírusovú záťaž u pacienta.

Pretože enzýmová imunoanalytická metóda sa v praxi špecialistu na infekčné ochorenia používa vo väčšej miere, niektorí pacienti s miernym ochorením sa môžu liečiť bez toho, aby museli počítať vírusovú záťaž. Ale PCR je všeobecne považovaná za „zlatý štandard“ diagnostiky v hepatológii, pretože kvôli jedinečnosti jej výsledku odstraňuje množstvo organizačných problémov. Preto má smerovanie pacienta na kvantitatívnu analýzu tieto ciele:

  • získanie údajov o počte vírusových častíc v krvi pacienta;
  • potvrdenie akútneho priebehu hepatitídy a včasné overenie chronického ochorenia;
  • nepretržitá detekcia latentných vírusových nosičov s pozitívnymi testami ELISA, monitorovanie ich virémie;
  • rozhodovaní o vymenovaní antivírusovej liečby, jej kombinácii a ukončení.

Najdôležitejším cieľom aplikácie kvantitatívneho PCR testu na detekciu HBV je identifikovať možné kombinácie liečby. V prípadoch vysokej vírusovej záťaže poskytuje výsledok analýzy špecialistovi možnosť pokračovať v kombinácii liekov. Počas liečby je ľahké určiť účinnosť predpísanej farmakologickej liečby na základe výsledkov PCR. Vzhľadom na to, že sa riadi iba údajmi imunofermentálnych metód, nie je možné včas určiť skutočnosť liečby a jej aktuálnu účinnosť. Kvantitatívny test v reálnom čase je preto nevyhnutnou analýzou pred začatím liečby akútnej hepatitídy, latentnej vírusovej infekcie s vysokou virémiou a chronickou HBV.

Interpretácia výsledkov kvantitatívnych testov PCR

Výklad výsledkov kvantitatívneho testu PCR by mal vykonať ošetrujúci lekár pacienta. Je potrebné vyhodnotiť diagnostický indikátor a určiť terapeutickú taktiku.

Štandardný analyzátor je schopný produkovať kvantitatívny indikátor, ktorý odráža počet kópií vírusovej DNA prítomnej v študovanej žilovej krvi. Merné jednotky - kópie / ml, IU / ml (kópie na mililiter, medzinárodné jednotky na mililiter). Interpretácia výsledkov je uvedená v tabuľke s uvedením rôznych jednotiek merania.

Štúdie vírusu hepatitídy B (ELISA a PCR) t

Antigén „s“ vírusu hepatitídy B (HBsAg)

Povrchový antigén hepatitídy B v sére normálne chýba.
Detekcia povrchového antigénu hepatitídy B (HBsAg) v sére potvrdzuje akútnu alebo chronickú infekciu vírusom hepatitídy B.

Pri akútnom ochorení sa HBsAg deteguje v sére v posledných 1-2 týždňoch inkubačnej doby a prvých 2-3 týždňov klinického obdobia. Cirkulácia HBsAg v krvi môže byť obmedzená na niekoľko dní, preto by ste sa mali snažiť o skoré počiatočné vyšetrenie pacientov. Metóda ELISA umožňuje detekciu HBsAg u viac ako 90% pacientov. Takmer u 5% pacientov najcitlivejšie výskumné metódy nedetekujú HBsAg, v takýchto prípadoch je etiológia vírusovej hepatitídy B potvrdená prítomnosťou anti-HBcAg JgM alebo PCR.

Koncentrácia HBsAg v sére vo všetkých formách závažnosti hepatitídy B vo výške ochorenia má značný rozsah výkyvov, existuje však určitý model: v akútnom období existuje inverzný vzťah medzi koncentráciou séra HBsAg a závažnosťou ochorenia.

Vysoké koncentrácie HBsAg sú častejšie u miernych a stredne ťažkých foriem ochorenia. V ťažkých a malígnych formách je koncentrácia HBsAg v krvi často nízka a u 20% pacientov s ťažkou formou a v 30% s malígnym antigénom v krvi sa vôbec nedá zistiť. Vzhľad na tomto pozadí u pacientov s protilátkami proti HBsAg sa považuje za nepriaznivý diagnostický znak; je určený v malígnych formách hepatitídy B.

V akútnom priebehu hepatitídy B sa koncentrácia HBsAg v krvi postupne znižuje až do úplného vymiznutia tohto antigénu. HBsAg zmizne u väčšiny pacientov do 3 mesiacov od nástupu akútnej infekcie.

Zníženie koncentrácie HBsAg o viac ako 50% do konca tretieho týždňa akútneho obdobia spravidla indikuje ukončenie procesu infekcie. Zvyčajne u pacientov s vysokou koncentráciou HBsAg vo výške ochorenia, je detekovaný v krvi niekoľko mesiacov.
U pacientov s nízkymi koncentráciami HBsAg zmizne oveľa skôr (niekedy niekoľko dní po nástupe ochorenia). Všeobecne je čas detekcie HBsAg v rozsahu od niekoľkých dní do 4-5 mesiacov. Maximálna doba detekcie HBsAg s hladkým priebehom akútnej hepatitídy B nepresahuje 6 mesiacov od nástupu ochorenia.

HBsAg možno nájsť u zdravých ľudí, spravidla v profylaktických alebo náhodných štúdiách. V takýchto prípadoch sa skúmajú iné markery vírusovej hepatitídy B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti HBeAg a študuje sa funkcia pečene.

V prípade negatívnych výsledkov sú potrebné opakované štúdie na HBsAg.
Ak opakované krvné testy dlhšie ako 3 mesiace odhalia HBsAg, tento pacient je klasifikovaný ako chronický pacient s vírusovou hepatitídou B.
Prítomnosť HBsAg je pomerne bežná. Na svete je viac ako 300 miliónov prepravcov a v našej krajine je približne 10 miliónov prepravcov.
Ukončenie cirkulácie HBsAg s následnou sérokonverziou (tvorba anti-HBs) vždy indikuje regeneráciu tela.

Krvný test na prítomnosť HBsAg sa používa na nasledujúce účely:

  • na diagnostiku akútnej hepatitídy B:
    • inkubačná doba;
    • akútne ochorenie;
    • skoré oživenie;
  • na diagnostiku chronickej vírusovej hepatitídy B;
  • pre choroby:
    • pretrvávajúca chronická hepatitída;
    • cirhóza pečene;
  • na identifikáciu pacientov v rizikových skupinách: t

  • pacientov s častými hemotransfúziami;
  • pacientov s chronickým zlyhaním obličiek;
  • pacientov s viacnásobnou hemodialýzou;
  • pacientov so stavom imunodeficiencie, vrátane AIDS.
  • Hodnotenie výsledkov výskumu

    Výsledky štúdie sú vyjadrené kvalitatívne - pozitívne alebo negatívne. Negatívny výsledok indikuje neprítomnosť séra HBsAg. Pozitívny výsledok - identifikácia HBsAg indikuje inkubáciu alebo akútne obdobie akútnej vírusovej hepatitídy B, ako aj chronickej vírusovej hepatitídy B.

    Protilátky proti jadrovému antigénu vírusu hepatitídy B JgG (anti-HBcAg JgG)

    Normálne sérové ​​anti-HBcAg chýba v sére.
    U pacientov s anti-HBcAg sa JgG objavuje v akútnom období vírusovej hepatitídy B a pretrváva počas celého života. Anti-HBcAg JgG je vedúcim markerom prenesenej HBV.

    Krvné testy na anti-HBcAg JgG sa používajú na diagnostiku:

  • chronická vírusová hepatitída B v prítomnosti HBs antigénu v sére;
  • vírusová hepatitída B.
  • Hodnotenie výsledkov výskumu

    Výsledok štúdie je vyjadrený kvalitatívne - pozitívny alebo negatívny. Negatívny výsledok indikuje neprítomnosť sérového anti-HBcAg JgG. Pozitívny výsledok - identifikácia anti-HBcAg JgG indikuje akútnu infekciu, rekonvalescenciu alebo predtým prenesenú vírusovú hepatitídu B.

    "E" antigén vírusu hepatitídy B (HBeAg)

    Normálne HBeAg v sére chýba.
    HBeAg sa nachádza v sére väčšiny pacientov s akútnou vírusovou hepatitídou B. Zvyčajne zmizne v krvi pred antigénom HBs. Vysoká hladina HBeAg v prvých týždňoch ochorenia alebo jeho detekcia viac ako 8 týždňov dáva dôvod na podozrenie z chronickej infekcie.

    Tento antigén sa často deteguje pri chronickej aktívnej hepatitíde vírusovej etiológie. Zvláštny záujem v definícii HBeAg je skutočnosť, že jej detekcia charakterizuje aktívnu replikačnú fázu infekčného procesu. Bolo zistené, že vysoké koncentrácie HBeAg zodpovedajú vysokej aktivite DNA polymerázy a charakterizujú aktívnu replikáciu vírusu.

    Prítomnosť HBeAg v krvi indikuje jeho vysokú infekčnosť, t.j. prítomnosť aktívnej infekcie hepatitídy B v tele, ktoré sa vyšetruje, a je detegovaná len v prítomnosti antigénu HBs v krvi. U pacientov s chronickou aktívnou hepatitídou sa antivírusové lieky používajú len vtedy, keď sa HBeAg zistí v krvi. HBeAg - antigén - marker akútnej fázy a replikácie vírusu hepatitídy B.

    Krvný test na prítomnosť antigénu HBe sa používa na diagnostiku:

  • inkubačná doba vírusovej hepatitídy B;
  • prodromálne obdobie vírusovej hepatitídy B;
  • akútne obdobie vírusovej hepatitídy B;
  • chronickej perzistujúcej vírusovej hepatitídy B.
  • Hodnotenie výsledkov výskumu

    Výsledok štúdie je vyjadrený kvalitatívne - pozitívny alebo negatívny. Negatívny výsledok indikuje neprítomnosť séra HBeAg. Pozitívny výsledok - detekcia HBeAg indikuje inkubáciu alebo akútne obdobie akútnej vírusovej hepatitídy B alebo pokračujúcu replikáciu vírusu a infekciu pacienta.

    Protilátky proti antigénu "e" vírusu hepatitídy B (anti-HBeAg)

    Anti-HBeAg v sére zvyčajne chýba. Vzhľad anti-HBeAg protilátok zvyčajne indikuje intenzívne odstránenie vírusu hepatitídy B a menšie infekcie pacienta z tela.

    Tieto protilátky sa objavujú v akútnom období a pretrvávajú až 5 rokov po infekcii. Pri chronickej perzistujúcej hepatitíde sa anti-HBeAg nachádza v krvi pacienta spolu s HBsAg. Sérokonverzia, t.j. prechod HBeAg na anti-HBeAg, s chronickou aktívnou hepatitídou, častejšie prognosticky priaznivý, ale rovnaká sérokonverzia nezlepšuje prognózu závažnej cirhóznej transformácie pečene.

    Krvné testy na prítomnosť anti-HBeAg sa používajú v nasledujúcich prípadoch v diagnostike vírusovej hepatitídy B:

  • stanovenie počiatočného štádia ochorenia;
  • akútna infekcia;
  • skoré oživenie;
  • rekonvalescencia;
  • neskorého štádia obnovy.
  • diagnóza nedávno prenesenej vírusovej hepatitídy B;
  • diagnostika chronickej perzistujúcej vírusovej hepatitídy B.
  • Hodnotenie výsledkov výskumu

    Výsledok štúdie je vyjadrený kvalitatívne - pozitívny alebo negatívny. Negatívny výsledok indikuje neprítomnosť protilátok proti HBeAg v sére. Pozitívnym výsledkom je detekcia protilátok proti HBeAg, čo môže indikovať počiatočné štádium akútnej vírusovej hepatitídy B, akútnej periódy infekcie, skorého štádia rekonvalescencie, rekonvalescencie, nedávno prenesenej vírusovej hepatitídy B alebo perzistujúcej vírusovej hepatitídy B.

    Kritériami pre prítomnosť chronickej hepatitídy B sú:

  • detekciu alebo periodickú detekciu HBV DNA v krvi;
  • nepretržité alebo pravidelné zvyšovanie aktivity ALT / AST v krvi; t
  • morfologické príznaky chronickej hepatitídy pri histologickom vyšetrení biopsie pečene.
  • Detekcia vírusu hepatitídy B pomocou PCR (kvalitatívne) t

    Vírus hepatitídy B v krvi normálne chýba.
    Kvalitatívne stanovenie vírusu hepatitídy B metódou PCR v krvi umožňuje potvrdiť prítomnosť vírusu v tele pacienta a tým stanoviť etiológiu ochorenia.

    Táto štúdia poskytuje užitočné informácie pre diagnostiku akútnej vírusovej hepatitídy B v inkubácii a včasných vývojových štádiách ochorenia, keď chýbajú hlavné sérologické markery pacienta v krvi. Sérová vírusová DNA je detegovaná u 50% pacientov v neprítomnosti HBeAg. Analytická citlivosť metódy PCR nie je menšia ako 80 vírusových častíc v 5 μl, posledná detekčná vzorka DNA, špecificita - 98%.

    Táto metóda je dôležitá pre diagnostiku a monitorovanie priebehu chronickej HBV. Približne 5-10% prípadov cirhózy a iných chronických ochorení pečene je spôsobených chronickým nosičom vírusu hepatitídy B. Markery aktivity takýchto ochorení sú prítomnosť HBeAg a DNA vírusu hepatitídy B v krvi.

    Metóda PCR umožňuje stanoviť v krvi DNA vírusu hepatitídy B kvalitatívne aj kvantitatívne. Stanovený fragment v obidvoch prípadoch je jedinečná DNA sekvencia génu štruktúrneho proteínu vírusu hepatitídy B.

    Detekcia DNA vírusu hepatitídy B v biomateriáli pomocou PCR je nevyhnutná pre:

  • riešenie sporných výsledkov sérologických testov;
  • zistenie akútneho štádia ochorenia v porovnaní s predchádzajúcou infekciou alebo kontaktom;
  • kontrolovať účinnosť antivírusovej liečby.
  • Vymiznutie DNA hepatitídy B z krvi je známkou účinnosti liečby

    Detekcia vírusu hepatitídy B pomocou PCR (kvantitatívne) t

    Táto metóda poskytuje dôležité informácie o intenzite vývoja ochorenia, účinnosti liečby a vývoji rezistencie na aktívne liečivá.
    Na diagnostiku vírusovej hepatitídy pomocou PCR v sére sa použijú testovacie systémy, ktorých citlivosť je 50-100 kópií vo vzorke, čo umožňuje detekciu vírusu v koncentrácii 5 x 103-3 -104 kópií / ml. PCR pri vírusovej hepatitíde B je určite nevyhnutná na posúdenie vírusovej replikácie.

    Sérová vírusová DNA je detegovaná u 50% pacientov v neprítomnosti HBeAg. Ako materiál na detekciu DNA vírusu hepatitídy B môže slúžiť krvné sérum, lymfocyty a hepatobiopsia.

    • Hodnotenie úrovne virémie je nasledovné:
    • menej ako 2,10 ^ 5 kópií / ml (menej ako 2,10 ^ 5 IU / ml) - nízka virémia;
    • od 2,10 ^ 5 kópií / ml (2,10 ^ 5 IU / ml) do 2,10 ^ 6 kópií / ml (8,10 ^ 5 IU / ml) - stredná virémia;
    • viac ako 2,10 ^ 6 kópií / ml - vysoká virémia.

    Existuje vzťah medzi výsledkom akútnej vírusovej hepatitídy B a koncentráciou DNA HBV v krvi pacienta. S nízkou hladinou virémie sa proces chronizácie infekcie blíži nule, s priemerom, proces je chronizovaný u 25-30% pacientov a s vysokou úrovňou virémie, akútna vírusová hepatitída B sa najčastejšie stáva chronickou.

    Indikácie liečby chronického HBV interferónu-alfa by sa mali považovať za indikátory aktívnej replikácie vírusu (detekcia HBV HBV, HBeAg a HBV DNA v krvnom sére počas predchádzajúcich 6 mesiacov).

    Kritériom hodnotenia účinnosti liečby je vymiznutie HBEAg a HBV DNA v krvi, čo je zvyčajne sprevádzané normalizáciou hladín transamináz a dlhodobou remisiou ochorenia, HBV DNA zmizne z krvi do 5. mesiaca liečby u 80% pacientov. Zníženie úrovne virémie o 85% alebo viac do tretieho dňa od začiatku liečby v porovnaní s východiskovým stavom je rýchle a pomerne presné kritérium na predpovedanie účinnosti liečby.

    PCR analýza pre hepatitídu B

    DNA vírus rodiny Hepadnaviridae je priamym pôvodcom hepatitídy B. Analýza hepatitídy B pomocou PCR umožňuje detekciu vírusu infikovanej DNA v krvi pacienta. Výsledok pozitívneho typu na HBV DNA dokazuje prítomnosť infekcie v krvi pacienta. Je potrebné poznamenať, že diagnóza pomocou PCR analýzy umožňuje nielen určiť prítomnosť infekcie, ale aj jej kvantitatívne zaťaženie a aktivitu. Táto metóda je spoľahlivá, presná a reprodukovateľná. Kvantifikácia HBV DNA pomocou qPCR sa môže použiť na monitorovanie účinnosti HBV terapie a je užitočná na pochopenie prirodzenej histórie HBV v endemickej oblasti.

    K infekcii hepatitídou B dochádza prostredníctvom domáceho alebo sexuálneho kontaktu - priamym kontaktom s infikovanou krvou. Po infekcii vírus vstupuje do pečeňových buniek, v ktorých pokračuje v aktívnej reprodukcii. Cez krvný obeh sa patogénne bunky rozšírili po celom tele. Stojí za zmienku, že bunky hepatitídy B sú vysoko odolné voči kyselinám a vysokým teplotám. Je schopný udržať svoje škodlivé vlastnosti po dobu šiestich mesiacov.

    Typy PCR pre hepatitídu B

    K dnešnému dňu existujú dva typy diagnostiky, ktoré sú predpísané, ak máte podozrenie na prítomnosť vírusu hepatitídy B: kvalitatívna PCR (umožňuje určiť so 100% presnosťou prítomnosť vírusu v krvi) a kvantitatívnu PCR (umožňuje určiť stupeň vírusovej aktivity).

    Ak existuje podozrenie na infekciu HBV alebo ak iné diagnostické metódy nepriniesli jasné výsledky, predpíše sa vysokokvalitná PCR. Tento typ PCR analýzy je veľmi ľahko dešifrovateľný: negatívny (žiadny vírus nebol detegovaný v krvi), pozitívny (vírus detegovaný v krvi). Hlavnou úlohou kvalitatívnej analýzy je zistiť prítomnosť infikovaných buniek v skorých štádiách ochorenia. Ak bol vírus diagnostikovaný dva týždne po údajnej infekcii, účinnosť liečby bude oveľa vyššia. Ak je vírus v krvi asi dva mesiace, ochorenie sa stáva chronickým, preto sa nedá úplne vyliečiť.

    Ak kvalitatívna diagnóza potvrdí prítomnosť HBV v krvi, lekár Vám predpíše kvantitatívnu analýzu.

    Kvantitatívna analýza umožňuje určiť aktivitu vývoja vírusu v tele pacienta. Tento typ PCR analýzy je priradený:

    • určiť štádium ochorenia;
    • monitorovať účinnosť aplikovanej terapie;
    • na stanovenie úrovne rezistencie vírusu na konkrétny liek;
    • na výber liekov.

    Kvantitatívne ukazovatele vírusu v krvi sa merajú v IU na mililiter alebo DNA na mililiter.

    Ak lekár predpíše kvantitatívnu diagnózu okamžite, bez kontroly kvality, potom sa za normu považuje 75 IU na mililiter. Ak sa zistí menej medzinárodných jednotiek, výsledkom je, že HBV sa nezistí, keď sú hodnoty nad normálne, pričom sa diagnostikuje prítomnosť vírusovej hepatitídy B.

    Interpretácia kvantitatívnej diagnostiky

    Nasledujúce ukazovatele (v kópiách / mililitroch) sa považujú za normu CRP pri hepatitíde B: menej ako 10 3 - inaktívny vírus; od 10 4 do 10 5 - vírus je zvyčajne neaktívny; - aktívny vírus; 10 - vírus vo vysokom štádiu aktivity.

    Na základe kvantitatívnych ukazovateľov je možné určiť so 100% presnosťou formu ochorenia (nosič, akútna alebo chronická), reakciu vírusu na liečbu, potrebu ďalšej diagnostiky.

    Chronická forma hepatitídy B je stanovená, ak je aktivita vírusu 105 kópií na mililiter. Dopravca je diagnostikovaný v prípade, že skóre je nižšie ako 10 kópií na mililiter.

    Počas obdobia liečby je potrebné pravidelne (raz za tri mesiace) opakovať kvantitatívnu diagnostiku, aby sa včas zvážilo obdobie, kedy sa vírus vyvíja imunitu voči použitým liekom a mení sa metóda. Ak boli všetky štúdie vykonané správne a bola zvolená účinná liečba, opakovaná analýza (po troch dňoch liečby) ukáže pokles aktivity patogénnych buniek aspoň o osemdesiatpäť percent.

    Biopsia pečene sa uskutočňuje len v prípade, keď šesť mesiacov liečby preukázalo, že hladiny ALT sú dvakrát vyššie ako normálne a PCR diagnostika ukazuje rýchlosť nižšiu ako 105 kópií na mililiter krvi.

    Príprava na prieskum

    Na analýzu je potrebná venózna krv. Aby sa dosiahli čo najpresnejšie výsledky, je potrebné pripraviť sa na postup: odmietnuť prijať potravu najmenej osem hodín pred odberom krvi; na dva dni odmietnuť liečbu drogami (je nevyhnutné upozorniť lekára na užívanie liekov); pred darovaním krvi musíte stráviť dvadsať minút v režime pokoja; Dvanásť hodín pred zákrokom sa vzdávajte športových cvičení, alkoholických nápojov, fajčenia a jesť tučné jedlá.

    Je dôležité: ak je diagnóza potrebná pre dieťa mladšie ako päť mesiacov, potom musí každých desať minút šesťdesiat minút pred odberom krvi podať pohár prevarenej vody.

    Zhrnutie

    PCR analýza hepatitídy B je dnes najpresnejšou metódou na diagnostiku vírusu. Metóda umožňuje určiť mutované a skryté formy ochorenia, diagnostikovať ochorenie v prvých dňoch infekcie, preto zvoliť najúčinnejšiu liečbu. Laboratórny asistent porovnáva výsledky analýzy s normou a potom ich privádza k záveru. Údaje sa spracujú do dvoch týždňov. Aby sme získali odporúčanie pre PCR analýzu, je potrebné kontaktovať hepatológa, špecialistu na infekčné ochorenia alebo virologa. Je dôležité si uvedomiť, že čím skôr sa dostanete k lekárovi, tým rýchlejšie výsledky dosiahnete, a preto bude liečba efektívnejšia.

    Vysvetlenie PCR a biochemická analýza hepatitídy

    Hepatitída je zápalový proces v pečeni vyplývajúci z deštrukcie buniek toxickými látkami. Rozlúštenie analýzy hepatitídy umožňuje objektívne posúdiť zdravotný stav pacienta trpiaceho ochorením pečene. Lekár infekčných chorôb vám povie, ako porozumieť výsledkom štúdie a predpísať ďalšiu liečbu. Pacient, ktorý nezávisle odštudoval získané údaje, vyvodzuje určité závery, ktoré nie vždy zodpovedajú realite.

    Vírus hepatitídy B je obsiahnutý v sére a špecifické laboratórne diagnostické metódy umožňujú detekciu antigénov patogénov a protilátok proti nim.

    Zoznam testov hepatitídy

    Diagnóza vírusového zápalu pečene je potvrdená špeciálnymi štúdiami. Pred liečbou sa pacient testuje:

    1. Pacient poskytuje krv na výskum ráno, medzi 7.00 a 9.00 hod. Pacient by sa nemal zdržať 12 hodín. Kvantitatívna analýza hepatitídy B určuje prítomnosť vírusu a titra protilátok v sére. Lekár zároveň predpisuje štúdiu, ktorá identifikuje HBV DNA pomocou PCR reakcií.
    2. U infikovaných pacientov sa zistila prítomnosť anti-HBc IgG proteínu a HBsAg antigénu. Špecifický imunoglobulín indikuje rýchly nárast koncentrácie vírusu hepatitídy v sére pacienta. V prípade negatívneho testu na anti-HBc sa IgG vykonáva ďalší výskum prítomnosti iných ochorení.
    3. Pri štúdiu obdobia akútneho ochorenia určte imunoglobulíny HBeAg a anti-HBc IgM. Stanovenie správnej diagnózy je možné až po objavení vírusovej RNA - hepatitída je v tomto prípade potvrdená molekulárno-biologickou metódou.
    4. PCR sa široko používa na diagnostiku ochorenia pečene - kvantitatívna metóda vám umožňuje predpísať účinnú liečbu hepatitídy.

    Imunologická štúdia

    Na stanovenie schopnosti pacienta vysporiadať sa s nebezpečným vírusom diagnostikovať úroveň odporu tela. Vzhľadom na celý komplex laboratórnych štúdií sú stanovené kvantitatívne a kvalitatívne ukazovatele imunologických faktorov - protilátky proti hepatitíde B.

    Proteín HBsAg je povrchový antigén, ktorý je zložkou superkapsidu (vírusového obalu) patogénu. Jeho hlavnou funkciou je účasť na procese adsorpcie vírusu zdravými pečeňovými bunkami. Peptid HBsAg je odolný voči faktorom prostredia - zásaditosti (Ph = 10), 2% roztoku chlóramínu a fenolu.

    Marker HBsAg je prítomný v sére infikovanej osoby. Bezprostredne po jeho objavení RNA nielenže premieňa svoju syntézu, ale tiež obsahuje častice Ar z predchádzajúceho markera. Je dôkazom vývoja aktívnej fázy hepatitídy.

    Prítomnosť HBeAg u chronického pacienta indikuje začiatok aktívnej fázy infekčného procesu.

    Anti-HBc marker obsahuje 2 typy protilátok - IgG a IgM. Je to proteín špecifický pre jeden antigén. Akútna forma ochorenia je charakterizovaná prítomnosťou anti-HBc a IgM. Ich pozitívna hodnota označuje predchádzajúce ochorenie pečene.

    Kvantitatívna analýza

    Na stanovenie aktivity patogénu predpíšte analýzu PCR. Stanovuje úroveň vírusovej záťaže a šance na zotavenie pacienta. Polymerázová reťazová reakcia sa uskutočňuje po skončení latentného obdobia. V procese výskumu nie je určený len HBsAg, ale aj marker HBeAg.

    Dekódovanie PCR analýzy hepatitídy vám umožňuje určiť stupeň aktivity patologického procesu a účinnosť komplexnej terapie.

    Lekár určí, aké citlivé je telo pacienta na antivírusové lieky a či je možné prijať opatrenia na odstránenie príčin chronického ochorenia pečene. V tomto prípade sa index transaminázy zvyšuje a index aktivity kauzatívnych činidiel je niekoľkokrát vyšší ako normálny index, koncentrácia aminokyselín je viac ako 106 kópií DNA na ml.

    Norma transaminázy v krvi zodpovedá hodnotám enzýmov AsAT a AlAT. Alanínaminotransferáza u žien nepresahuje 32 U / l a u mužov 40 U / l. Koncentrácia vírusu u ľudí infikovaných v ranom veku je 100 000 kópií na ml.

    V inaktívnej fáze vírusu av prípade anti-HBc je HBV DNA v rozsahu 2000 IU / ml a počet kópií nepresahuje 10 000.

    Metóda molekulárnej hybridizácie

    Odozva ELISA na hepatitídu určuje typ antigénu s protilátkami a enzýmami. Fázový výskum je prijateľný, ale správna diagnóza môže byť vykonaná iba odborníkom, ktorý včas získal výsledok analýzy.

    Markery vírusovej hepatitídy počas imunotestu sú HBsAg, Anti-Hbcor IgM. Na začiatku ochorenia sú zvýšené: PPBR-1,55, OPcr-0,27, HBsAg je 1,239, vírusová DNA nie je detegovaná. Výsledok analýzy po liečbe ukazuje pokles HBsAg na 1,07 a HBeAg sa stáva negatívnym. Je prítomná DNA vírusu.

    Ak sa získajú negatívne hodnoty IgM, IgG, IgA - je potrebné určiť, či ochorenie chýba alebo či došlo k úplnému uzdraveniu.

    Pozitívna hodnota IgG označuje úplne vytvorenú imunitu. V tomto prípade sa IgM nedeteguje. Je dôležité vedieť, že štúdia o hepatitíde odhalila vysoký titer IgM.

    V akútnom období ochorenia sa objavujú negatívne hodnoty IgG. Remisia vírusového ochorenia je sprevádzaná negatívnym imunoglobulínom IgM. ELISA je relatívne jednoduchá a bezpečná pre zdravie pacienta.

    Biochemický krvný test

    Štúdium séra identifikuje patológiu v tele, špecifikuje diagnózu, umožňuje vyhodnotiť prácu pečene a získať informácie o metabolizme. Biochemická analýza sa vykonáva ráno. Na výskum s použitím materiálu odvodeného z venóznej krvi.

    Je dôležité dodržiavať pravidlá prípravy na testovanie na hepatitídu C - v tomto prípade nebude dekódovanie všetkých indikátorov skreslené. Celkový bilirubín je normálne 8,55 - 20,2 mmol / l a jeho zvýšenie indikuje výskyt ochorenia pečene. Hodnoty AlAT a AsAT sa tiež zvyšujú v prípade hepatitídy B.

    Albumín u zdravého pacienta je 35 - 55 g / l. Nízke hladiny proteínov v plazme naznačujú vírusový zápal pečene.

    Normálny LDH index je v rozsahu 125 - 250 U / l a jeho rast znamená deformáciu a deštrukciu buniek chorého orgánu. Indikátor LDH (sorbitoldehydrogenáza) indikuje stav tkaniva pečene. Normálna hodnota je 0–1 U / l. Rýchlosť rastu je charakteristická zložka akútneho priebehu hepatitídy B alebo jej prechod do chronického štádia.

    Proteín GGG má nízku aktivitu v krvnej plazme.

    Jeho rast sa pozoruje pri zápale pečene a pretrváva dlho. Norma - 25–49 U / l pre mužov, pre ženy je indikátor výrazne nižší - 15–32 U / l.

    Dekódovanie príznakov chronickej hepatitídy B

    Identifikácia markerov ochorenia pečene je hlavnou úlohou lekára, ktorý sa snaží zabrániť chybám v diagnóze. Je dôležité vedieť, že výsledok analýzy ovplyvňujú nasledujúce fyziologické faktory:

    Tabuľka antigénov a ich dekódovanie umožní pacientovi získať predstavu o povahe ochorenia.

    Typy PCR pre hepatitídu B a interpretácia výsledkov

    Polymerázová reťazová reakcia je typ krvného testu, ktorý dokáže presne detegovať vírus hepatitídy B. Charakteristickým znakom tejto metódy je, že je schopný preukázať HBV vo svojich skorých štádiách - jeden mesiac po infekcii, zatiaľ čo špecifický antigén je detegovaný u pacienta až po 2 mesiacoch., PCR môže detekovať nielen normálny DNA vírus, ale aj mutantné kmene, ktoré žiadna iná analýza nemôže vidieť.

    Pri dekódovaní PCR pre hepatitídu B sú výsledky porovnané so štandardnými hodnotami. Na základe toho sa urobili závery o prítomnosti ochorenia (pozitívny výsledok), koncentrácii vírusu (aktivita) alebo neprítomnosti ochorenia (negatívny výsledok). Spracovanie dát je 2 týždne.

    Typy PCR pre vírusovú hepatitídu B

    Existujú 2 typy diagnostiky, ktoré sú predpísané pre hepatitídu B. Vysoko kvalitná PCR umožňuje s presnosťou 100% povedať, či je HBV v krvi alebo nie. Kvantitatívna PCR ukazuje aktivitu vírusu, to znamená, koľko HBV DNA je obsiahnuté v 1 ml krvi.

    Kvalitná PCR a jej interpretácia

    Krvný test na hepatitídu B pomocou PCR môže detegovať iba prítomnosť DNA fragmentov. Vymenovaný v prípade, keď pacient má podozrenie na HBV infekciu (HBV) alebo keď iné diagnostické metódy, napríklad, sérologické testy neposkytujú jasnú odpoveď. Dekódovanie výsledkov pri vykonávaní kvalitatívnej analýzy je veľmi jednoduché:

    • negatívny výsledok - žiadny vírus;
    • pozitívny výsledok - zistený vírus.

    Účelom vysoko kvalitnej PCR je potvrdiť alebo poprieť prítomnosť vírusu hepatitídy B, ako aj včasnú diagnostiku. Ak sa HBV zistí do 1-2 týždňov po infekcii, liečba bude čo najúčinnejšia. Pri aktívnom vývoji HBV 2 mesiace a viac sa ochorenie stáva chronickým a nedá sa úplne vyliečiť.

    V prípade, že vysoko kvalitná PCR na hepatitídu je indikovaná prítomnosťou vírusu, ďalším krokom je vykonanie kvantitatívnej diagnostiky.

    Kvantitatívna PCR

    Za účelom efektívnej liečby alebo vyhodnotenia výsledkov liečby nestačí len vedieť, že pacient má HBV. Je potrebné kvantifikovať hodnotu DNA vírusu hepatitídy B v 1 ml krvi, tj vírusovej záťaži na tele. Tento typ PCR pre hepatitídu B sa vykonáva v nasledujúcich prípadoch:

    1. Pred predpisovaním liečby.
    2. Posúdiť účinnosť liečby.
    3. Určiť vývoj rezistencie vírusu na lieky.
    4. Určiť štádium, v ktorom sa choroba nachádza.

    Mernou jednotkou vírusu sú medzinárodné jednotky (IU / ml) alebo počet kópií DNA / ml, to znamená počet fragmentov DNA na 1 ml krvi. Pomer medzi týmito dvoma jednotkami závisí od zvoleného testovacieho systému a pohybuje sa od 2 do 7 kópií / ml v 1 IU / ml. Ak je systém neznámy, potom sa priemerná hodnota použije na konverziu:

    1 IU / ml = 5 kópií / ml

    Ak sa kvantitatívna analýza vykoná okamžite, hraničná rýchlosť na diagnostikovanie ochorenia je 75 IU / ml. Keď je výsledok nad týmto indikátorom, diagnóza HBV sa vykoná nižšie - HBV sa nedeteguje.

    Liečba kvantitatívnej PCR

    Pri hepatitíde B sú nasledujúce hodnoty vírusovej záťaže (virémie), kópie / ml, štandardmi PCR:

    • 10 ^ 5 kópií / ml. Keď sa s veľkou vírusovou aktivitou zvýši hladina ALT častejšie 2-krát za šesť mesiacov, potom sa okamžite predpíše antivírusová liečba.

    Aby sme zistili, ako sa bude DNA hepatitída správať z hľadiska chronicity, tj prechod na chronickú formu z akútnej, použijú sa aj výsledky PCR diagnostiky:

    • DNA HBV s 2 x 10 6 6 kópiami / ml znamená, že získanie chronickej formy ochorenia je nevyhnutné.

    Príprava na prieskum

    Na stanovenie prítomnosti HBV pomocou PCR sa z žily odoberie krv. Procedúra sa vždy vykonáva prísne na lačný žalúdok a najlepšie je dostať sa do laboratória ráno, keď je prirodzený čas odpočinku z jedla 8 hodín. Aby boli výsledky vyšetrenia správne, je potrebné vopred vedieť, ako sa pripraviť na kliniku správne. Ďalšie kroky sú nasledovné:

    1. Odmietnutie z tukových potravín, fajčenie, alkohol a šport 12 hodín pred zákrokom.
    2. Pred darovaním krvi odpočívať 20 minút.
    3. Pred začatím zákroku by mala byť sestra upozornená na užívané lieky.

    Varovanie! Ak sa diagnóza vykonáva u dieťaťa mladšieho ako 5 rokov, potom pol hodiny pred zákrokom by mal každých 10 minút vypiť 1 pohár prevarenej vody.

    Zhrnutie

    Doposiaľ je PCR diagnostika na detekciu hepatitídy B najpresnejšou metódou. Metóda umožňuje vidieť skryté a mutované formy ochorenia, identifikovať chorobu v prvých týždňoch po infekcii, a teda vykonávať účinnú liečbu. V závislosti od situácie sa vykonáva kvalitatívna alebo kvantitatívna PCR, ktorá je zameraná na detekciu HBV a stanovenie jej aktivity. Ak chcete byť testovaní, musíte kontaktovať virologa, špecialistu na infekčné ochorenia alebo hepatológa.

    Podstata analýzy PCR pre hepatitídu B a jej výsledky

    Vírusová hepatitída B sa úspešne lieči, ak je včas detegovaná a počet protilátok a antigénov v krvi pacienta je správne stanovený. Pomocou enzýmového imunotestu na hepatitídu je možné detegovať prítomnosť vírusových markerov, ale nemôžu určiť presný stupeň procesu.

    Na kvantitatívne hodnotenie sa použila PCR diagnostika. Pomocou testu je možné pomocou antivírusových liekov spočítať počet markerov, predpovedať priebeh ochorenia a pravdepodobnosť vyliečenia.

    Hlavnou výhodou štúdie je schopnosť detegovať aj minimálne koncentrácie vírusu, identifikovať patogén v štádiu druhu.

    Diagnóza hepatitídy B

    Vírus hepatitídy B je vysoko nákazlivý a odolný voči vonkajším vplyvom. Zostáva aktívny v krvi pacienta niekoľko týždňov. Preto je každá osoba vystavená riziku infekcie, aj keď je pozorovaná profylaxia.

    Ak chcete diagnostikovať ochorenie, predpíšte nasledujúce štúdie:

    Podstata metódy PCR

    Americký chemik K.Mullis dostal Nobelovu cenu a jeho diagnostická metóda sa stále používa.

    Predchodca PCR metódy (polymerázová reťazová reakcia) je považovaný za vedca z Nórska H. Kleppe. Najprv začal vykonávať amplifikáciu (regeneráciu) DNA s použitím krátkeho reťazca DNA, to znamená syntetického priméru (druh kópie).

    Vedec si však svoju myšlienku neuvedomil. Podobné štúdie vykonal americký chemik K.Mullis, ktorý v roku 1993 získal Nobelovu cenu za svoj vynález. Odvtedy bola PCR použitá na stanovenie otcovstva, diagnostikovanie genetických ochorení a detekciu vírusov.

    Podstatou reakcie je, že pomocou enzýmov sa skopíruje určitá časť DNA. Môžete kopírovať iba oblasť, ktorá zodpovedá zadaným parametrom a ak je v predloženej vzorke. Na začatie reakcie sa používajú nasledujúce zložky:

    1. Matrix DNA s miestom, ktoré sa má kopírovať.
    2. Priméry podobné štruktúre ako DNA.
    3. Polymeráza, to znamená enzým, ktorý spúšťa reakciu. Mala by byť termostabilná, to znamená, aby odolala teplotným extrémom.
    4. Roztok s určitými parametrami, zabezpečujúci priechod reakcie.

    Reakcia sa uskutočňuje v niekoľkých stupňoch:

    Na detekciu hepatitídy B sa používajú dva typy reakcií: kvantitatívne a kvalitatívne.

    Kvantitatívna PCR

    Kvantitatívna metóda určuje množstvo genómu HBV

    Kvantitatívna PCR zahŕňa simultánnu tvorbu kópií fragmentov DNA a stanovenie počtu molekúl. Meranie sa vykonáva po každom stupni, to znamená v reálnom čase. To sa dosahuje použitím fluorescenčných sond, ktoré sú obsiahnuté v reťazci molekúl a žiarenia v určitom období štúdie.

    Táto metóda sa používa na detekciu fragmentov DNA, ktoré sú markermi vírusu hepatitídy. Pomocou kvantitatívnej metódy je možné presne izolovať genotyp vírusu. Inými slovami, vypočíta sa počet kópií genómu HBV na počet buniek pacienta.

    Kvantitatívna analýza poskytuje odpovede na nasledujúce otázky:

    1. S akou intenzitou choroba postupuje.
    2. Ako účinná je liečba.
    3. Vyvinula sa rezistencia voči liekom?

    Kvantitatívne meranie je tiež nevyhnutné pre diagnostiku chronického štádia infekcie. Ak je množstvo DNA nižšie ako 100 ks / ml na normálnej úrovni transaminázy, potom je osoba nositeľom vírusu.

    V akútnej fáze je množstvo protilátok omnoho vyššie, pri antivírusovej terapii zvýšenie počtu protilátok indikuje vývoj rezistencie na liečivo, čo je signál na úpravu liečby.

    Vysoko kvalitná PCR

    Vysoko kvalitná PCR poskytuje menej informácií, ale dokáže eliminovať infekciu.

    Vysoko kvalitná PCR môže iba potvrdiť prítomnosť patogénu v krvi. Ak sú neprítomní, pacient nie je infikovaný, ak patogén vstúpi do krvi, výsledok bude pozitívny.

    S pomocou kvalitatívnej reakcie však nie je možné objasniť genóm vírusu, štádium ochorenia. Preto pre diagnózu HBV vykonali kvantitatívne aj kvalitatívne merania.

    Príprava na prieskum

    Na analýzu PCR sa vyžaduje venózna krv. To sa musí urobiť ráno nalačno.

    Pacient by sa mal na štúdiu riadne pripraviť:

    1. Na 10 hodín odmietnuť jedlo, môžete piť len čistú vodu.
    2. V predvečer prestať užívať alkohol, po dobu 4 hodín nefajčiť.
    3. Pred vyšetrením sa treba vyvarovať fyzického a emocionálneho stresu.
    4. Ak to nie je možné, prestaňte užívať lieky počas 2 dní, je potrebné informovať laboratórneho technika. Niektoré lieky majú vplyv na konečný výsledok.

    Interpretácia údajov

    V kvantitatívnej reakcii sa získané indikátory hodnotia v závislosti od počtu kópií DNA.

    Je ľahké interpretovať údaje merania kvality. On dáva buď pozitívnu alebo negatívnu odpoveď.

    V kvantitatívnej reakcii je možné vyhodnotiť získané indikátory v závislosti od počtu kópií DNA. Mernou jednotkou sú kópie / ml.

    Dáta sa dekódujú nasledovne:

    1. Ak je množstvo DNA HBV menšie ako 90, potom infekcia chýba. U pacienta sa vyvinula imunita po očkovaní alebo sa vyliečil z choroby.
    2. Keď sa počet kópií 2x100 hovorí o nosiči vírusu.
    3. Počet 2x106 označuje chronické štádium ochorenia.
    4. S DNA viac ako 2x109 má pacient akútne štádium hepatitídy.

    Chybné výsledky

    Výhody diagnostickej metódy pri použití polymerázových reakcií sú nasledovné: t

    1. Priama detekcia patogénov. Naproti tomu test ELISA poskytuje informácie o prítomnosti protilátok proti vírusu.
    2. Špecifickosť. To znamená, že je to DNA oblasť, ktorá je prítomná vo vzorke biomateriálu, ktorá sa kopíruje.
    3. Precitlivenosť. Spôsob môže dokonca detekovať fragmenty jednotlivých buniek.
    4. Diagnostika chorôb v akútnom a latentnom štádiu. To znamená, že ochorenie je možné diagnostikovať v štádiu predklinických prejavov.

    Metóda má nedostatky, ktoré vedú k falošným výsledkom. Najvýznamnejšou nevýhodou je pravdepodobnosť kontaminácie materiálu. Hlavným zdrojom kontaminácie sú zle spracované skúmavky, laboratórne ruky, reagencie.

    Časť DNA z predchádzajúcej reakcie môže vstúpiť do krvi. Preto sa na laboratóriá kladú zvýšené hygienické požiadavky: oddelené miestnosti, plastové rúrky, ultrafialové spracovanie laboratórií atď.

    Falošne negatívne výsledky môžu byť spôsobené zníženou citlivosťou reakcie. To sa deje v nasledujúcich situáciách:

    • pacient užíva lieky, napríklad antikoagulanciá;
    • osoba bola pred analýzou vystavená fyzickému stresu (šport, tvrdá práca);
    • nedávno sa vyskytla infekcia.

    Ak má pacient vysokú pravdepodobnosť infekcie a výsledok štúdie je negatívny, musí byť znovu vyšetrený.

    Pozri tiež:

    záver

    Metóda polymerázovej reťazovej reakcie je hlavnou a najviac informatívnou pre diagnostiku HBV. To umožňuje nielen stanoviť stav dopravcu infekcie, ale aj objasniť štádium ochorenia, vyhodnotiť výsledky liečby.

    Pre presnejšiu diagnostiku sa používa kvalitatívne a kvantitatívne meranie. Nevýhodou metódy je pravdepodobnosť kontaminácie, znížená citlivosť a pomerne vysoká cena.

    Aby boli výsledky čo najspoľahlivejšie, mali by sme sa riadne pripraviť na štúdiu a vykonávať ju na klinike s príslušnou licenciou a dobrou povesťou.

    DNA hepatitídy B a PCR

    Testy DNA a PCR vírusu hepatitídy B sú najcitlivejšie testy, ktoré detekujú stopy molekulárnej DNA v pečeni, ktoré identifikujú prítomnosť vírusu. Podstata metódy spočíva vo viacnásobnom kopírovaní fragmentu DNA patriaceho k pôvodcovi ochorenia.

    PCR typu hepatitídy B je polymerázová reťazová reakcia externého chemického činidla so skúmaným biologickým materiálom zameraná na identifikáciu molekúl vírusovej DNA v krvi a ich kvantitatívnych ukazovateľov na jednotku objemu. Analýza je priradená v týchto prípadoch:

    • ak sa u pacienta vyskytnú príznaky hepatitídy B;
    • počas diagnostických činností pre zmiešanú hepatitídu;
    • objasniť účinnosť liečby.

    Na analýzu PCR sa odoberá venózna krv. Pred štúdiou by ste sa mali zdržať konzumácie asi 8 hodín.

    Normálny výsledok pri detekcii DNA vo víruse sa považuje za „nezistený“. To znamená, že vírus nie je prítomný v krvi alebo jeho obsah je zanedbateľný. Konečnú diagnózu môže vykonať len odborník na základe komplexnej biochemickej a imunologickej analýzy krvnej plazmy pre hepatitídu typu B. Lekár predpisuje priebeh liečby. Samoliečba zahŕňa príliš veľa rizika.

    Na analýzu PCR sa vykonáva odber vzoriek z venóznej krvi.

    Metóda PCR umožňuje detekciu DNA patogénu aj pri minimálnej prítomnosti vo vybranej vzorke krvi. Okrem toho analýza umožňuje detegovať antigény, ktoré už boli vyvinuté pre vírus. Každý z antigénov indikuje špecifické štádium ochorenia:

    • HBsAg - vírus je momentálne prítomný.
    • Anti-HBcor - patogén v súčasnosti chýba, ale bol v minulosti.
    • Anti-HBs - v krvi sú protilátky proti hepatitíde B (ako alternatíva - herpes, HIV, chlamydia, mykoplazmóza, kandidóza, tuberkulóza, encefalitída prenášaná kliešťami a mnohé ďalšie ochorenia).

    Patológia a jej znaky

    Hepatitída B alebo HBV je vírusová infekcia, ktorá postihuje pečeňové bunky. Je nebezpečný nielen priamym pôsobením na parenchým orgánu, ktorý oslabuje bariérovú funkciu a celkovú imunitu. Možné sú závažnejšie následky, ako napríklad cirhóza pečene a výskyt malígnych novotvarov.

    HBV sa prenáša krvou osoby infikovanej hepatitídou, jeho výkalmi, kontaktom so sliznicami, najmä počas pohlavného styku, kožnými léziami, nesterilnými injekčnými striekačkami počas transfúzie krvi alebo počas operácií brucha. Novorodenec môže byť nakazený jeho chorou matkou pri dotyku trhlín v bradavkách.

    Nasledujúce príznaky sú charakteristické pre hepatitídu B:

    Neobvyklá únava

    • zvýšenie únavy pri nízkych zaťaženiach;
    • neobvyklá únava;
    • ťažkosť v pravej hypochondriu;
    • znížená chuť do jedla, nevoľnosť;
    • žltosť kože, skleróza očí;
    • svetlé výkaly;
    • tmavý moč;
    • bolesť v kĺboch.

    Inkubačná doba, po ktorej sa tieto príznaky začínajú objavovať, je od jedného do šiestich mesiacov. Toto je obdobie akumulácie vírusových buniek v krvnom obehu pečene. Keď ich koncentrácia dosiahne kritickú hmotnosť, vírus sa rozpadne cez membrány hepatocytov a naďalej sa množia vo vnútri buniek. V dôsledku toho zomierajú pečeňové bunky, vyvíja sa cirhóza, ktorá pri absencii vhodných terapeutických opatrení spôsobuje, že pacient je smrteľný. Včasný krvný test na PCR a DNA hepatitídy B pomáha vyhnúť sa negatívnym.

    Indikácie pre PCR sú:

    • pozitívny test DNA potvrdzujúci diagnózu hepatitídy B;
    • akútnej a chronickej hepatitídy;
    • zmiešaná hepatitída;
    • kvantitatívne stanovenie vírusu v krvnom sére;
    • rozvoj taktiky efektívnej terapie.

    Príprava na analýzu

    Príprava na diagnostiku pomocou PCR je určená typom biomateriálu. Takže krv a moč darovať len ráno, na prázdny žalúdok. Z urogenitálnej oblasti sa tiež berú šmuhy a škrabance. Jediným obmedzením pre ženy je menštruácia. Pohlavie je obmedzené na obe pohlavia v predvečer výskumu.

    Výsledky PCR možno považovať za spoľahlivé len vtedy, ak je pacient riadne pripravený na zákrok. Táto štúdia predpokladá nasledujúce podmienky: t

    • plný duchovného pohodlia, absencia akéhokoľvek vzrušenia. Aby sa táto analýza mohla uskutočniť aj doma. Je potrebné zavolať lekára len s príslušným vybavením;
    • abstinencie od jedla, alkoholu, fajčenia, fyzickej aktivity aspoň 8-12 hodín pred analýzou, inak budú údaje výskumu skreslené;
    • 15-20 minút úplného uvoľnenia pred odberom krvi;
    • prerušenie liečby (ak to nie je možné, je potrebné upozorniť laboratórium);
    • deťom mladším ako päť rokov pred polhodinovou analýzou by sa mala dať prevarená voda na pitie v malých porciách.

    Ako je štúdia

    PCR analýza je založená na princípoch používaných molekulárnou biológiou. Pozostávajú z použitia špeciálnych enzýmov, ktoré štiepia a replikujú časti DNA a RNA infekčného agens, ktorý sa nachádza v krvi. Po tejto operácii sa získané vzorky identifikujú v databáze dostupnej v laboratóriu. Súčasne sa zisťuje typ infekcie a koncentrácia patogénu v krvi.

    Pre štúdiu sa používa zosilňovač - termostat schopný ohrievania a chladenia rúrok s biomateriálom. To je nevyhnutné pre aktiváciu procesov replikácie. Presnosť analýzy závisí od presnosti parametrov teploty.

    Výsledky dekódovania

    Pozitívnym výsledkom pre pacienta je, že laboratórny záver „nebol zistený“. To znamená, že v krvi nie je prítomná DNA hepatitídy B. V číselnom vyjadrení je to približne 120 IU / ml alebo 200 kópií na rovnakú jednotku objemu krvi. Táto hodnota je normou. Požiadavka na biologický materiál spočíva v tom, že by nemal byť kontaminovaný.

    Dekódovanie iných výsledkov analýzy umožňuje vykonať nasledujúce diagnózy:

    • Koncentrácia DNA hepatitídy B v krvi je viac ako 200 kópií, ale pod kritickou úrovňou. Ťažká patológia chýba.
    • Vírus v miernej forme, až do 500 kópií na ml. Voľba liečby závisí od ukazovateľov pečeňovej biopsie a stupňa zhoršenia jej funkcií.
    • Zvýšená koncentrácia vírusu (viac ako 500 kópií / ml). Zápalový proces v aktívnej fáze a vyžaduje intenzívnu antivírusovú liečbu.
    • Maximálna vírusová záťaž (viac ako 800 kópií na ml). Terapeutické opatrenia sú vyvinuté na základe stavu pacienta a sú zamerané na maximálne možné zlepšenie.
    Pre pacienta je dobrým výsledkom záver "nezistený"

    Stanovenie kvantitatívnych ukazovateľov obsahu DNA hepatitídy B počas PCR je základom pre výber terapeutického priebehu. Po troch alebo šiestich mesiacoch sa znova vykonajú testy na testovanie účinnosti antivírusovej liečby.

    Funkcia polymerázovej reťazovej reakcie

    V metóde PCR sa používajú dva prístupy na stanovenie DNA patriacej vírusu: kvalitatívne a kvantitatívne.

    Kvalitatívny prístup potvrdzuje alebo popiera prítomnosť hepatitídy B. PCR sa predpisuje na žiadosť pacienta, ktorý má podozrenie, že je infikovaný infekciou HBV alebo v prípade, keď včasná diagnóza nedáva jednoznačný výsledok iným spôsobom.

    Ak sa vírus hepatitídy B zistí najneskôr dva týždne po jeho vstupe do tela, je najpravdepodobnejšia pozitívna prognóza liečby. V budúcnosti sa choroba začne vyvíjať. Asi po dvoch mesiacoch vstúpi do chronickej fázy. Úplné vyliečenie v tomto prípade bude nemožné.

    Kvantitatívny prístup k PCR sa používa len vtedy, keď sa deteguje vírus. Hodnotí:

    • špecifická vírusová záťaž na pečeň;
    • intenzita progresie ochorenia;
    • odolnosť voči antivírusovým liečivám;
    • účinnosti liečby.

    Tieto ukazovatele majú priamy praktický význam. Zvlášť kvantitatívny ukazovateľ DNA. Prognóza v akútnej fáze hepatitídy B závisí od koncentrácie vírusu v krvnom obehu pečene, takže nízka koncentrácia vírusových buniek takmer úplne vylučuje prechod akútnej až chronickej hepatitídy. Títo pacienti nepredstavujú nebezpečenstvo pre ostatných. Vysoká vírusová záťaž prispieva k chronizácii patologického procesu a možnosti infekcie hepatitídy u ľudí, ktorí sú v kontakte s pacientom.

    Existuje tiež spojenie medzi koncentráciou vírusových génov v krvi a cirhotickou degeneráciou pečene a výskytom rakoviny parenchýmu.

    PCR testy pomôžu lekárovi odhaliť vírusové nosiče.

    Účinnosť antivírusovej liečby je určená stupňom poklesu koncentrácie hepatitídy B v pečeňovom obehu. Dostatočným výsledkom je zníženie vírusovej záťaže o 1-2 krát intenzívnej liečby z troch mesiacov na šesť mesiacov. Nižšie sadzby vyžadujú zmenu liečby.

    Prognóza vývoja patológie a určenie vhodnej terapie pochádza z:

    • kvantitatívny objem DNA vírusu pečene v krvnom sére;
    • súvisiace biochemické parametre (napríklad hladina leukocytov v krvi a obsah bilirubínu);
    • markery vírusovej infekcie;
    • výsledky biopsie pečene.

    PCR na všeobecné použitie

    Lekárovi pomáha analýza pomocou polymerázovej reťazovej reakcie:

    • detegovať nosiče vírusu;
    • predpovedať vývoj hepatitídy typu B;
    • zabezpečiť, aby sa choroba stala chronickou;
    • monitorovať aktivitu vírusu vo všetkých fázach vývoja;
    • identifikovať mutantné a skryté kmene hepatitídy B;
    • vyhodnotiť účinnosť liečby vírusu pri výbere určitej taktiky a zmeniť ho v prípade nedostatočného úspechu.

    Výhody metódy

    Na rozdiel od iných testov, ktoré sa používajú na diagnostiku hepatitídy B, má PCR:

    PCR analýza je mimoriadne citlivá.

    1. Výnimočná citlivosť. Technika umožňuje výskumníkovi zistiť pôvodcu ochorenia, aj keď je koncentrácia jeho molekúl DNA v krvi minimálna. To vám umožňuje prijať preventívne a liečebné opatrenia v ranom štádiu ochorenia, keď to zjavne ešte nie je vyjadrené žiadnymi príznakmi.
    2. Široké pokrytie príležitostí. PCR môže detekovať nielen pôvodcu vírusovej hepatitídy B, ale aj množstvo ďalších patológií.
    3. Univerzálnosť prístupov. Biomateriál pre výskum môže byť krv, sliny, sliznice a koža.
    4. Efektivitu. Záver bude pripravený presne jeden deň po odbere krvi (výsledok analýzy sa získa najneskôr do 7 hodín).
    5. Spoľahlivosť. Za všetkých podmienok PCR metódy nikdy nevykazujú falošné údaje.
    6. Štúdia cenovej dostupnosti. Pri nákladoch je PCR len o niečo vyššia ako obvyklé testy, ktoré využívajú krv ako biomateriál.

    Jedinými nákladmi na výskum je jeho technologická zložitosť. Pre vysoko kvalitnú implementáciu PCR je potrebné veľmi čisté biomateriály, moderné vybavenie a dobre vyškolený personál. Pre diagnostiku je vhodnejšie použiť túto metódu v špecializovaných laboratóriách.

    Vírusová hepatitída B označuje choroby, ktorých úplné vyliečenie je možné len v najskorších štádiách vývoja. Identifikácia ochorenia v tejto fáze pomáha precitlivenej diagnóze pomocou PCR. Prvé príznaky, ktoré spôsobujú podozrenie na poškodenie pečene vírusom, by mali byť dôvodom na konzultáciu s odborníkom. Ak sa potvrdí diagnóza, liečba sa má začať okamžite. To zlepší prognózu a zvýši pravdepodobnosť podpory pečene v zdravom stave po mnoho rokov.