Kvalitatívna analýza PCR pre hepatitídu C

Hepatitída je závažné ochorenie, ktoré má mnoho príčin. Základom jeho vývoja je priame alebo nepriame poškodenie pečene. S ohľadom na jeho dôležitosť pre celý organizmus je možné len odhadnúť, aká zložitá je patológia. V tomto článku sa budeme podrobnejšie venovať charakteristike priebehu a laboratórnej diagnostike hepatitídy C.

Príčinou ochorenia je vírusová látka, ktorá sa vzťahuje na patogény obsahujúce RNA. Má charakteristický rys - schopnosť zmutovať, to znamená zmeniť jeho štruktúru. V dôsledku toho infekcia uniká útoku imunitného systému a vo väčšine prípadov vedie k chronickému zápalu v pečeni.

Vzhľadom na existenciu rôznych podtypov vírusu by výber liekov mal byť založený na výsledkoch genotypizácie. Napriek dlhej štúdii ochorenia a charakteristikám štruktúry HCV nebolo doteraz možné vyvinúť špecifickú vakcínu pre túto chorobu.

Ťažkosti včasnej diagnózy spočívajú v asymptomatickom priebehu hepatitídy, v dôsledku čoho osoba navštevuje lekára v štádiu cirhózy. Na včasné odhalenie choroby sú potrebné pravidelné lekárske vyšetrenia. Len pomocou laboratórneho vyšetrenia krvi je možné zistiť HCV a zabrániť infekcii okolo vás. Faktom je, že dopravca infekcie môže dlhodobo hádať o patológii a naďalej prenášať vírus na zdravých ľudí.

Spôsoby prenosu

Vo väčšine prípadov sa vírus šíri krvou, pretože obsahuje najvyššiu koncentráciu patogénnych látok. Infekcia sa teda prenáša:

• s hemodialýzou;
• s infikovanou ihlou;
• v procese boja, pri poranení kože a pri kontakte s krvou;
• krvnou transfúziou (transfúziou krvi).

Pravdepodobnosť infekcie počas intimity je nevýznamná, pretože semeno a vaginálny výtok obsahujú malé množstvo patogénov. Riziko infekcie je významne zvýšené v rozpore s integritou sliznice genitálií. Toto sa pozoruje pri agresívnom a análnom sexe.

Pokiaľ ide o vertikálny spôsob prenosu, vykonáva sa v procese práce. V období gravidity plodu nemôže patogén preniknúť cez placentu do embrya. Pri prirodzenom pôrode je patogénny agens prenášaný na dieťa traumatizáciou jeho kože, keď je pozorovaný kontakt s krvou matky.

Po preniknutí patogénu do zdravého organizmu začína syntéza protilátok, ktoré sú chránené pred infekciou a patria do imunitných štruktúr. Nachádzajú sa v počiatočnej štúdii osoby používajúcej ELISA.

Na potvrdenie diagnózy sa pacient podrobí polymerázovej reťazovej reakcii. Je to analýza genetického materiálu patogénneho agens a stanovenie vírusovej záťaže.

Laboratórna diagnostika hepatitídy C

Laboratórna diagnostika začína enzýmovým imunotestom. Jeho hlavnou úlohou je detekovať protilátky produkované proti patogénu. Jeho účinnosť je takmer 95%. Vďaka tomuto výskumu je možné identifikovať nosič vírusu v predklinickom štádiu a poslať ho na ďalšie vyšetrenie.

Kvalitatívna analýza ELISA indikuje prítomnosť alebo neprítomnosť imunoglobulínov v krvi pacienta. Jeho výsledok môže byť "pozitívny" alebo "negatívny". Po prijatí prvej odpovede je osoba odoslaná na ďalšie vyšetrenie - PCR. Jeho cena závisí od kvality reagencií a laboratória. Náklady na polymerázovú reťazovú reakciu môžu dosiahnuť 4 tisíc rubľov.

Vlastnosti PCR

Pomocou polymerázovej reťazovej reakcie nám aj malé množstvo biologického materiálu umožňuje odhadnúť vírusovú záťaž v krvi, to znamená vypočítať koncentráciu patogénov v jednom mililitri tekutiny.

S nástupom PCR sa diagnóza hepatitídy stala oveľa jednoduchšou. Analýza umožňuje identifikovať HCV RNA, stanoviť štádium infekčného procesu a infekciu vírusového nosiča.

Existuje niekoľko typov genetickej diagnostiky:

1. Kvalitatívna analýza PCR pre hepatitídu C - potvrdzuje prítomnosť alebo neprítomnosť HCV v krvi subjektu:
2. kvantitatívne, prostredníctvom ktorého môžete vypočítať koncentráciu vírusov a stanoviť štádium ochorenia. Výsledok sa udáva v IU / ml alebo kópiách / ml (v závislosti od laboratória);
3. genotypovanie - potrebné na určenie genotypu HCV. To je potrebné pre presný výber liekov, ktoré budú v tomto prípade najúčinnejšie. Analýza nepriamo indikuje závažnosť patologického procesu v pečeni. V treťom genotype patogénu je teda najčastejšie pozorovaná steatóza, ktorej základom je akumulácia tuku v hepatocytoch (jeho bunkách). Okrem toho, typ vírusu ovplyvňuje výsledok a trvanie terapeutického priebehu.

Kvalitatívna analýza PCR pre hepatitídu C

Najprv sa v laboratóriu vyšetrí biologický materiál na prítomnosť HCV RNA. Je dôležité si uvedomiť, že kvalitatívna analýza hepatitídy C má určitú úroveň citlivosti, a preto nemusí vždy poskytnúť správnu odpoveď. V tomto prípade sa odporúča vykonať laboratórnu diagnostiku pomocou iných činidiel.

Na získanie spoľahlivých výsledkov by sa mali použiť testovacie systémy s citlivosťou najmenej 50 IU / ml.

Výsledok diagnostiky môže byť buď „pozitívny“ alebo „negatívny“. Ak sa patogén nenachádza v krvi, štúdia sa dokončí. Ak je vo vzorke detegovaná patogénna látka, kvantifikuje sa vírusová záťaž.

Falošne negatívna odozva sa získa, keď sa proces poruší, napríklad aktívne zložky, ktoré potláčajú konštrukciu kópií patogénu vstupujúceho do média. Preto nie je možné zobraziť skutočný obraz krvi, a preto nie je diagnostikovaná infekcia osoby.

Falošne pozitívny výsledok možno dosiahnuť, ak bola skúmavka na odber biologického materiálu, ako aj prostredie pre štúdiu kontaminované. Okrem toho je takáto analýza možná pri zmiešaných infekciách, keď je pečeň ovplyvnená niekoľkými vírusmi, napríklad hepatitídou C a D.

Indikácie pre kvalitatívny výskum

Lekár môže pacientovi predpísať kvalitatívnu štúdiu identifikácie RNA vírusu hepatitídy C:

• po prijatí pozitívnej alebo pochybnej reakcie na enzýmový imunotest;
• na overenie diagnózy;
• stanovenie vírusovej záťaže;
• nastavenie štádia ochorenia;
• diagnózy zmiešanej infekcie. Hepatitída C často infikuje pečeň súčasne vírusom „D“;
• stanovenie terapeutickej taktiky s prihliadnutím na genotyp pôvodcu;
• hodnotenie dynamiky zmien počas liečby antivírusovými liekmi.

Výhody polymerázovej reťazovej reakcie zahŕňajú:

1. vysoká citlivosť techniky, ktorá umožňuje stanoviť fakt infekcie v predklinickom štádiu;
2. identifikácia genetického materiálu patogénu a nie jeho protilátok;
3. možnosť vytvorenia podtypu patogénneho agens;
4. vysoká miera diagnostiky, pretože sa nevyžaduje žiadne očkovanie materiálu na živnom médiu a stačí použiť špecifické testovacie systémy. Osoba dostane výsledok po 5 hodinách;
5. univerzálnosť. Analýza umožňuje identifikovať akýkoľvek genetický materiál (RNA, DNA). Vďaka tomu môže lekár potvrdiť hepatitídu C a iné typy ochorenia (B);
6. schopnosť detegovať latentnú infekciu.

Kvantitatívny výskum

Pri štúdiu krvi pomocou polymerázovej reťazovej reakcie je možné vypočítať počet patogénov v pevnom objeme biologického materiálu. Indikátor sa uvádza v IU / ml. Prostredníctvom analýzy je možné určiť stupeň nákazy pacienta, určiť štádium infekčného procesu a tiež vyhodnotiť účinnosť liekovej terapie.

Na základe PCR odborník rozhodne, ktoré dávky liekov môžu blokovať reprodukciu patogénov. Okrem toho sa určuje trvanie antivírusovej liečby a prognóza života. Je dôležité si uvedomiť, že testovacie systémy majú vysokú citlivosť, preto metóda umožňuje potvrdiť infekciu osoby v predklinickom štádiu.

genotypu

Vzhľadom na schopnosť patogénu mutovať je jeho genotyp nevyhnutný na určenie taktiky liečby a voľby antivírusových liekov. Napríklad liečba HCV 1 trvá 48 týždňov, pričom pozitívny trend bol pozorovaný len v 60% prípadov. Genotypy 2 a 3 majú priaznivejšiu prognózu. Antivírusové lieky sú predpisované na 8 mesiacov a ich účinnosť dosahuje 85%.

Podľa štatistík sú vo väčšine prípadov HCV 1, 2 a 3 registrované v Ruskej federácii.

Pri dešifrovaní laboratórneho testu možno túto odpoveď uviesť - „nie je napísaná“. To znamená, že vírus cirkuluje v obehovom systéme pacienta a testovací systém ho nedokáže rozpoznať. Výsledok analýzy v tomto prípade naznačuje, že patogén nie je typický pre danú zemepisnú oblasť.

Ako získať spoľahlivé výsledky?

Kvôli kvalitatívnej štúdii PCR na detekciu RNA pôvodcu hepatitídy C sa ukázali správne výsledky, je potrebné dodržiavať požiadavky na prípravu na laboratórnu diagnostiku:

1. odber krvi sa vykonáva nalačno a „hladová“ medzera by nemala byť kratšia ako 8 hodín;
2. dva dni pred štúdiou sa odporúča prestať piť alkoholické nápoje a zanechávať korenené, mastné a údené jedlá;
3. zrušiť zavedenie liekov, ktoré znižujú zrážanlivosť krvi, napríklad heparínu. Ak sú tieto lieky predpísané zo zdravotných dôvodov, musíte to oznámiť lekárovi. Okrem toho by mal byť špecialista vedomý prijímania iných liekov, ktoré môžu ovplyvniť výsledok laboratórneho výskumu;
4. V predvečer zberu biologického materiálu by sa nemali vykonávať fyzioterapeutické postupy a mali by byť vystavené ťažkej fyzickej námahe.

Výsledky analýzy môžu ovplyvniť nielen osoby, ktoré darujú krv, ale aj iné faktory, a to:

• nekvalitné odbery krvi;
• nedodržiavanie odporúčaní o preprave biologického materiálu;
• nedostatočné školenie laboratórnych pracovníkov;
• nedodržiavanie výskumnej techniky;
• zavedenie antikoagulancií (heparín) v predvečer odberu krvi. Táto skupina liekov znižuje zrážanlivosť, čím spomaľuje prácu činidiel.

V rôznych laboratóriách sa môže diagnostická odpoveď mierne líšiť, ale tieto chyby neovplyvňujú konečný výsledok štúdie.

Osobitná pozornosť sa venuje typom testovacích systémov, ktoré sa používajú v laboratóriu. Často sa uprednostňujú činidlá s vysokou citlivosťou. To je dôležité pre pacientov s nízkou vírusovou záťažou, pretože je ťažké ich zistiť.

Ako často sa vykonáva laboratórny test?

Primárna polymerázová reťazová reakcia sa uskutočňuje u ľudí, ktorí boli detegovaní imunologickým testom na protilátky proti patogénu hepatitídy. V tomto prípade je určený na potvrdenie skutočnosti infekcie osoby a stanovenie štádia ochorenia. Okrem toho analýza umožňuje určiť podtyp vírusu, ktorý je obzvlášť dôležitý pre výber liekov.

Ďalšie obdobie pre povinné laboratórne testovanie je 3 mesiace od začiatku antivírusovej liečby. Diagnostika umožňuje vyhodnotiť účinnosť liekov, upraviť dávku alebo ich nahradiť.

Okrem základných testov sa môže PCR vykonať dodatočne po 4 a 24 týždňoch od začiatku liečby. Pozitívna prognóza ochorenia je potvrdená poklesom vírusovej záťaže po troch mesiacoch liečby. Napríklad by sa mal znížiť z 1 milióna IU / ml na niekoľko sto tisíc.

Ak koncentrácia patogénnych látok v krvi ostane na rovnakej úrovni alebo sa mierne zvýši, znamená to neúčinnosť antivírusových látok a vyžaduje ich nahradenie. Na konci liečby je možné pomocou PCR potvrdiť zotavenie pacienta.

Pre správnu interpretáciu výsledkov laboratórnej diagnostiky sa vyžaduje konzultácia s odborníkom na hepatológ alebo infekčné ochorenie. Vzhľadom na vysokú frekvenciu falošných odpovedí v teste ELISA sa analýza používa výlučne na primárny skríning. Pre dôkladnejšie vyšetrenie používanej polymerázovej reťazovej reakcie.

Pro analýza PCR pre vírus hepatitídy C

Hepatitída C je závažné ochorenie pečene pre každú osobu. Patológia je spôsobená flavivírusom HCV v štruktúre molekuly RNA, ktorá nesie všeobecný genetický kód vírusu.

Patológia môže byť rôznych foriem, všetko priamo závisí od všeobecného stavu osoby a od vlastností každého jednotlivého organizmu.

Táto štruktúra umožňuje analyzovať PCR na prítomnosť vírusu kategórie hepatitídy C v tele.

To vám umožní včas identifikovať vírus, ktorý je nebezpečný pre ľudí, podstúpiť liečbu drogovej závislosti a obnoviť zdravie, chrániť telo pred zničením pečene.

Vírus HCV sa môže prejaviť ako v akútnej, tak aj v nebezpečnej forme a chronicky. Ak sa zistí, že sa tento vírus vyskytol v jednej alebo inej chvíli, musí sa priradiť k analýze PCR.

Prečo sa vykonáva analýza PCR?

Na základe výsledkov analýzy bude lekár schopný zostaviť liečebný režim.

Laboratórna lekárska analýza PCR pre hepatitídu C je štúdia biologického materiálu odobratého na stanovenie flavavírusu. Štúdia predstavuje polymerázovú reťazovú reakciu.

Ukazuje celkovú kvantitatívnu hodnotu vírusovej lézie, jej kvalitatívne vlastnosti a je tiež možné určiť genotyp vírusu, ktorý obsahuje RNA.

Je to dôležité! Na základe tejto analýzy lekár určí spôsob, typ terapie a jej trvanie. Prostredníctvom analýzy je tiež možné určiť celkový epidemiologický faktor, teda úroveň rizika prenosu ochorenia na iných nosičov.

Analýza v modernej medicíne sa tiež nazýva analýza RNA. Dôvodom je to, že pre flavavírus hepatitídy C je zložená z častice RNA, ktorej veľkosť je približne 30-60 nm. Jedným z charakteristických znakov tohto vírusu je určitá tendencia k mutácii.

Každý prítomný poddruh alebo genotyp má rôzne rezistencie. Táto okolnosť sa stáva základom pre rôzne metódy výskumu a liečby ochorenia, ako aj ďalšiu prognózu s dobre vykonanou liečbou.

Ako

Analýza sa vykonáva striktne na prázdny žalúdok, to znamená, že žilová krv sa podáva pred raňajkami. Testovacia metóda sa vykonáva pomocou Real-Time PCR alebo vysoko citlivou diagnostikou moderných štandardov, ktorá sa vykonáva v reálnom čase.

Dolná hranica detekcie je v tomto prípade 15 IU / ml. Analýza sa vykonáva striktne s použitím uzavretých automatizovaných systémov. Hepatitídu C je možné stanoviť pomocou testov, ako je COBAS AMPLICOR s celkovou úrovňou citlivosti 50-100 IU / ml.

Je to dôležité! Všetky typy podobného moderného laboratórneho výskumu sa vykonávajú na základe zohľadnenia určitej hranice citlivosti.

Hovoríme o schopnosti činidla použitého na detekciu minimálnej úrovne schopnosti činidla určiť vírus v biologickom materiáli, ktorý je predmetom štúdie. Ak v tele nie je choroba, výsledok štúdie bude vyzerať ako „nenájdený“.

Na obrázku je znázornený obvod analýzy PCR:

Typy PCR analýzy a jej výsledky

Ak máte najviac drobných ochorení a bolesti v oblasti cookies, mali by ste okamžite konzultovať s lekárom, ktorý vykoná dôkladnú štúdiu. PCR analýza hepatitídy C je založená na troch hlavných bodoch:

1. Kvantitatívna analýza.
2. Kvalitatívna analýza.
3. Genotypizácia.

Vykonané testy poskytujú príležitosť na určenie a identifikáciu presnej povahy virémie a rôznych symptómov genetického plánu prítomnosti patogénu. V priamom pomere k citlivosti z vykonaného diagnostického systému sa môže lekársky výskum vykonať raz, ako aj určité potvrdenie.

Toto by sa malo vykonať s cieľom objasniť skôr získané výsledky a v tomto prípade sa používa citlivejším činidlom.

Vysoko kvalitná PCR

Kvalitatívna analýza pre PCR je ďalší názov pre štúdiu, ako je polymerázová reťazová reakcia. So štandardnou citlivosťou testu, ktorá umožňuje stanoviť prítomnosť vírusového mikróbu, budú indikátory v rozsahu 10-500 IU / ml.

Pri negatívnej analýze ochorenia bude analýza ukázať, že celková hladina koncentrácie v krvi pacienta bude rádovo nižšia ako všeobecná prahová hodnota citlivosti pre diagnostický systém.

Ak sa počas kvalitnej PCR získala odpoveď „nedetekovaná“, na následnú liečbu budete potrebovať poznať prah celkovej citlivosti činidla. Čo sa týka pozitívnej odozvy, počas analýzy PCR sa môže získať už štvrtý deň po infekcii. Štandardné proteínové frakcie k etablovaným flavavirom sa môžu objaviť oveľa neskôr.

Všeobecnú schému analýzy PCR je možné znázorniť nasledovne:

Kvantitatívna PCR

Kvantitatívna PCR je špeciálnym indikátorom vytvorenej vírusovej záťaže, čo odráža celkovú úroveň koncentrácie vírusovej RNA v ľudskom tele. Tento indikátor ukazuje množstvo vírusových RNA enzýmov, ktoré sú prítomné na kubický centimeter odobratý z krvnej žily.

Výsledky tejto štúdie v systéme medicínskeho výskumu sa označujú v jednotkách mililitra. Pri certifikátoch vydaných v rukách môže tento indikátor vyzerať ako 1,7 milióna alebo 1,700 000 IU / ml.

Pred uskutočnením protivírusovej terapie je týmto pacientom pridelená kvantitatívna PCR analýza. Druhýkrát sa koná 12. týždeň liečby, ktorý umožňuje správne vyhodnotiť výsledky liečby hepatitídou C. Inými slovami, analýza umožňuje určiť také dôležité parametre ako:

1. Určuje sa úroveň infektivity, to znamená stupeň rizika prenosu mikrobiálnych látok z infikovanej osoby na zdravého človeka. Čím vyššia je koncentrácia flavavírusovej RNA, tým vyššia je pravdepodobnosť infekcie inej osoby, čo je dôležité v sexuálnych vzťahoch.
2. Celková úroveň účinnosti a zvolený spôsob liečby.
3. Je to ideálna príležitosť na stanovenie trvania a prognózy antivírusovej terapie. Čím vyššie je zaťaženie, tým dlhšie bude ošetrenie trvať.

Stojí za to vedieť, že kvantitatívna PCR závisí od špecifického typu laboratórneho testu a prahu citlivosti. Najnižším limitom stanovenej normy je, že ukazovateľ nedosahuje 600 000 IU / ml.

Priemer je v rozmedzí 600 000 až 700 000 IU / ml. Ak boli výsledky získané nad 800 000 IU / ml, lekár okamžite zistí vysokú úroveň koncentrácie látky, ako je RNA, s vírusom prítomným v kompozícii.

Je to dôležité! Priamy vzťah medzi hladinou HCV RNA a závažnosťou ochorenia naznačuje, že tento vírus je prítomný v celkovom zložení krvi a tiež berie na vedomie komplexnosť patológie. Pacient môže mať dostatočne vysokú vírusovú záťaž. Okrem toho tento vzťah naznačuje, že dochádza k vážnemu poškodeniu buniek.

genotypu

Vzhľadom na relatívne vysokú mutačnú aktivitu HCV v prírode, v priebehu uskutočňovaného testovania, je možné určiť, ako je typ vírusu prítomný v krvi chorej osoby. V modernej medicíne je známych 11 genotypov vírusu, ako je napríklad hepatitída C. Zahŕňa pomerne veľký počet rôznych poddruhov alebo podtypov.

Typy 1, 2 a 3 sú známe a bežné v Rusku, genotypovanie je vo všeobecnosti veľmi dôležitým prvkom vykonanej analýzy. S ním lekár chápe úroveň rezistencie alebo rezistencie patológie voči vybraným liekom.

Takmer vždy, na základe tejto analýzy, sa buduje budúca liečba. Je to dôležité, pretože existujú pravidlá liečby, ako napríklad:

Kvalitatívna analýza hepatitídy C

8. marec 2017, 12:29 Odborné články: Nová Vladislavovna Izvchikova 0 10,547

Kvalitatívna analýza polymerázovej reťazovej reakcie - PCR pre hepatitídu C určuje prítomnosť alebo neprítomnosť HCV v tele. V laboratórnych podmienkach sa skúma štruktúra RNA, ktorá bude obsahovať vírus. V prípade zistenia vírusu C je potrebné podstúpiť priebeh liečby, pretože zanedbaný stav pečene bude mať vážne následky. Vysokokvalitná PCR sa vykonáva po regenerácii, aby sa potvrdila neprítomnosť protilátok. Menovaný a na bežnú kontrolu. Pri nízkej koncentrácii pôvodcu v krvi nemusí PCR (kvalitatívna) nič detegovať, pretože diagnostický systém má svoje vlastné prahy citlivosti. V prípade počiatočného štádia ochorenia alebo miernej formy sa PCR uskutočňuje ultradiagnostikou na ultracitlivých zariadeniach.

Čo je RNA vírus?

Termín RNA vírusu hepatitídy C (alebo RNA vírusu hepatitídy C) je samotné ochorenie pečene. Vírus C sa viaže na zdravú bunku tela tým, že preniká dovnútra. V priebehu času, sa šíri po celom tele, je potrebné len dostať do krvi. V dôsledku toho patogén preniká do pečene, fúzuje s bunkami a pracuje tvrdo. Pečeňové bunky (hepatocyty) pracujú pod jej vplyvom, prechádzajú zmenami a odumierajú. Čím dlhšie je vírus C v pečeni, tým väčší je počet buniek. Postupom času sa vyvíjajú nebezpečné ochorenia, ktoré vedú k malígnej degenerácii a smrti.

Infekcia pečene týmto typom vírusu sa nemusí prejavovať externe. Po mnoho rokov alebo desaťročí sa infikovaný človek cíti úplne zdravý a iba náhodné vyšetrenie najčastejšie odhaľuje patológiu. Pri darovaní krvi na hepatitídu sa skúma časť reťazca RNA (ribonukleová kyselina), ktorý je súčasťou ľudského génu (DNA). Výsledky laboratórnych testov by sa nemali používať na samoliečbu, pretože ide len o ukazovateľ. Presný obraz a ďalšia diagnóza je lepšie určená lekárom.

Po dokončení: indikácie pre výskum

Pri potvrdení HCV sa uskutoční PCR analýza (polymerázová reťazová reakcia). Štúdie PCR pomáhajú nájsť pôvodcu v štruktúre RNA a predpisujú účinnú liečbu. Menovaný v týchto prípadoch:

• zistenie príznakov zápalu pečene;
• skríningové štúdie na prevenciu;
• vyšetrovanie osôb v kontakte;
• diagnostika hepatitídy zmiešaného pôvodu (stanovenie hlavného patogénu);
• stanovenie úrovne reprodukčnej aktivity vírusu v chronickej forme;
• cirhóza pečene;
• na určenie účinnosti predpísanej liečby.

Výskum PCR predpisuje lekárovi, aby určil účinnosť priebehu liečby hepatitídy.

Existuje kvalitatívna aj kvantitatívna analýza PCR. Kvantitatívna PCR ukazuje percento RNA s nosičmi vírusu v krvi a kvalitatívne indikuje prítomnosť alebo neprítomnosť vírusu. Pozitívny indikátor kvality (prítomnosť RNA hepatitídy C) tiež vyžaduje kvantitatívny výskum. Vysoká úroveň koncentrácie pôvodcu hepatitídy C je spojená s rizikom jej prenosu, tj infekcie iných. Nízke čísla sú lepšie liečiteľné. Množstvo vírusov RNA v krvi nesúvisí s intenzitou ochorenia. PCR analýza sa tiež vykonáva v prípade terapie interferónom, aby sa stanovilo trvanie a komplexnosť liečebného postupu.

Vlastnosti vysoko kvalitnej PCR analýzy hepatitídy C

Kvalitatívna analýza je priradená ukazovateľovi polymerázovej reťazovej reakcie pre všetkých pacientov, ktorí majú protilátky proti hepatitíde C v krvi, tí, ktorí boli chorí a zotavení, musia znovu podstúpiť test. Odporúča sa vykonať analýzu hepatitídy B, potom v prípade pozitívneho záveru a hepatitídy D. Tiež kvalitatívne analyzovaná reakcia by sa mala vykonať v spojení s inými krvnými testami. Analýzy ukazujú úplný obraz šírenia vírusu.

Z výsledkov testov bude viditeľný alebo negatívny len pozitívny test na hepatitídu C, to znamená prítomnosť alebo neprítomnosť vírusu. Ak je výstup "detegovaný", vírus je a naďalej je aktívny. Označenie "nezistené" označuje neprítomnosť vírusu alebo jeho malého množstva. S týmto indikátorom je potrebné mať na pamäti, že analytická citlivosť diagnostických systémov je odlišná a že RNA hepatitída C môže byť stále v krvi, ale v analýze sa neprejavuje.

Zvlášť citlivá metóda PCR odhalila ultra hepatitídu C aj v malých množstvách. Používa sa fluorescenčná hybridizačná štúdia, ktorá je mnohonásobne vyššia ako štandardné PCR systémy. Metóda sa používa v niekoľkých prípadoch:

• podozrenie na skryté formy hepatitídy C;
• PCR diagnostika nepotvrdila patogén, ale sú tu protilátky;
• v prípade zhodnotenia;
• odhaliť skorú infekciu.

Späť na obsah

Dekódovacia analýza

Dekódovanie PCR HCV ovplyvňuje konečné rozhodnutie pri stanovení diagnózy, najmä pomocou ultrametodovej metódy. Hlavnou nevýhodou tejto štúdie je prísne dodržiavanie sterilných podmienok pre vzorku a materiály. Mierna odchýlka niekedy ukazuje nepresné analytické závery, komplikuje diagnostiku a následnú liečbu. Analýza PCR na stanovenie RNA hepatitídy nie vždy s istotou ukazuje obraz choroby, niekedy sú dovolené nepresnosti av oboch smeroch.

Pri diagnostike vírusu hepatitídy sa odporúča použiť komplexné vyšetrenie.

Norma ukazovateľov

Neprítomnosť JgM protilátok proti vírusovej hepatitíde C vo výsledkoch štúdie sa považuje za normu v analýze polymerázovej reťazovej reakcie. Zároveň zistenia sérologickej analýzy poukazujú na prítomnosť protilátok proti vírusu C, čo je tiež v normálnom rozsahu. Kvalitatívna definícia neukazuje intenzitu ochorenia, ale iba odhalí pôvodcu hepatitídy C v RNA. Táto analýza sa po spracovaní opakuje, aby sa potvrdila skutočná regenerácia.

odchýlky

Ak sú prítomné JgM protilátky proti HCV RNA, znamená to, že sa vyvíja infekcia. Ochorenie prebieha súčasne akútne alebo chronicky, prejavuje sa v rôznych štádiách. Ak sa zaznamená zníženie počtu protilátok, analýza ukáže, že výsledky liečby sa dosiahli počas zotavenia. Existujú mimoriadne zriedkavé prípady falošne pozitívnych nálezov v diagnostike. Nachádzajú sa u žien počas tehotenstva au ľudí s inými infekčnými chorobami.

PCR analýza pre hepatitídu C

Na diagnostiku "chronickej vírusovej hepatitídy C (CVHS)" je potrebné komplexné vyšetrenie osoby, ktorá zahŕňa klinické, laboratórne a inštrumentálne štúdie. Z hľadiska diagnózy pre správnu diagnózu je dôležitá metóda PCR - polymerázová reťazová reakcia.

Čo táto analýza ukazuje a prečo je potrebná?

Táto laboratórna metóda detekuje RNA vírusu hepatitídy C v ľudskej krvi. Spolu s enzýmovou imunoanalýzou (ELISA) na protilátky proti vírusu sa používa PCR na stanovenie diagnózy CVHC a jeho genotypu patogénu. Tento výskum je jednou z najnovších metód laboratórnej diagnostiky. Jeho spoľahlivosť pri CVHS prevyšuje 97%, čo sa považuje za veľmi dobrý ukazovateľ výskumu.

Existujú tri PCR krvné testy na CVHS: kvalitatívne, kvantitatívne a vírusové genotypovanie. Prvá štúdia (kvalitatívna analýza) vírusu ho deteguje v krvi, a preto sa používa len na diagnostiku.

Druhá (kvantitatívna) štúdia určuje stupeň vírusovej záťaže na tele, preto sa používa na monitorovanie účinnosti liečby.

Tretia PCR (genotypizácia) objasňuje diagnózu a stanovuje genotyp vírusu, ktorý je veľmi dôležitý pre určenie správnej antivírusovej liečby.

Podstatou techniky polymerázovej reťazovej reakcie je použitie enzýmov, ktoré znásobujú genetický materiál patogénu v biomateriáli. V procese takejto replikácie sa skúmavka s krvou niekoľkokrát zahrieva a ochladí na teplotu potrebnú na urýchlenie enzymatickej reakcie. V dôsledku týchto manipulácií sa množstvo vírusového genómu mnohokrát zvyšuje, čo umožňuje jeho detekciu aj pri minimálnom množstve.

PCR diagnostika má mnoho výhod oproti iným laboratórnym testom:

• vysoká citlivosť - 97-98%;
• zaručená analytická špecifickosť (odhaľuje presne patogén, ktorý chcete nájsť, a nie jeho príbuzný kmeň);
• rýchlosť vedenia (nie je to viac ako 2 dni, aby sme dospeli k záveru).

Tri typy PCR testov

Vysoko kvalitná PCR analýza je priradená všetkým pacientom, u ktorých analýza ELISA detegovala protilátky proti vírusu HVGS. Po vykonaní vysoko kvalitnej PCR je možné získať dve možnosti odpovede: "RNA je detekovaná" alebo "RNA nie je detekovaná." Na zistenie minimálneho množstva vírusu v krvi sú potrebné testovacie systémy s citlivosťou najmenej 50 IU / ml. Ak je koncentrácia vírusu v krvi pacienta nižšia, ako môže určiť diagnostika, výsledok štúdie môže byť falošne negatívny. Aby sa zabránilo takejto diagnostickej chybe, laboratóriá vykonávajúce PCR diagnostiku by mali byť vybavené vysoko citlivými testovacími systémami. V laboratóriu "Invitro" sa používajú napríklad testy s citlivosťou 15 IU / ml. Laboratórni pracovníci sú povinní poskytnúť pacientom a lekárom informácie o citlivosti testov na základe ich prvej žiadosti.

Kvantitatívna analýza PCR určuje stupeň virémie, to znamená koncentrácie patogénu v krvi, vírusovej záťaže. Výsledok tejto štúdie, na rozdiel od vysoko kvalitnej PCR, je vyjadrený v počtoch, napríklad 2 x 10 x 6 IU / ml, čo znamená 2 milióny medzinárodných jednotiek v 1 ml krvi. Niektoré laboratóriá používajú iný indikátor - počet kópií / ml. Tieto dva ukazovatele sa ľahko konvertujú: 1 medzinárodná jednotka sa rovná 4 kópiám RNA. Teda 2 x 10 x 6 IU / ml bude znamenať, že 8 x 10 x 6 kópií vírusovej RNA v 1 ml, t.j. 8 miliónov kópií v 1 ml krvi.

Genotypizácia je definícia jedného zo šiestich genotypov vírusu. Klinický obraz, rýchlosť vývoja komplikácií pečene a prognóza budúceho života pacienta závisia od genotypu pôvodcu. Genotyp vírusu je veľmi dôležitý už v štádiu diagnózy, pretože kombinácia liečiv a trvanie terapeutického postupu určeného pacientovi závisí od jeho správneho určenia.

Avšak aj tento zdanlivo „dokonalý“ laboratórny výskum má svoje nevýhody:

• štúdia replikuje genetický materiál všetkých patogénov, dokonca aj neživých, ktorý môže skresliť výsledok. Preto, aby sa sledovala účinnosť pomocou PCR, re-analýza sa vykonáva najskôr 2 mesiace po predchádzajúcom, takže mŕtve vírusy môžu „opustiť“ organizmus pacienta;
• časť vírusového genómu, ktorá sa stanoví pomocou testovacích systémov, môže byť teoreticky prítomná v iných vírusoch alebo mikroorganizmoch, takže existuje možnosť falošne pozitívnej reakcie;
• vírusy rýchlo mutujú. Niekedy je rýchlosť a rozsah vírusovej mutácie taký vysoký, že testovací systém prestane zachytávať svoj genóm. V dôsledku toho je možný falošne negatívny výsledok.

Na vyrovnanie týchto nedostatkov výrobcovia laboratórnych testovacích systémov pre diagnostiku PCR neustále vykonávajú svoje testy vrátane krížových reakcií a citlivosti na konkrétny genotyp vírusu.

Ako urobiť PCR test na hepatitídu C?

Aby bol záver vyšetrenia PCR spoľahlivý, je potrebné striktne dodržiavať pravidlá jeho prípravy:

• štúdia sa vykonáva nalačno (glukóza, tuky, minerály, ktoré sa dostávajú do krvi z potravy, môže ovplyvniť rýchlosť a kvalitu enzýmovej reakcie);
• medzera medzi posledným jedlom a odberom krvi na analýzu by mala byť najmenej 8 hodín;
• v predvečer štúdie je zakázané konzumovať alkohol a konzumovať tučné jedlá, ktorých doba eliminácie sa predlžuje;
• deň pred odchodom do laboratória by sa mali vyvarovať silného fyzického a emocionálneho stresu;
• do času odberu krvi sa neodporúča fajčiť.

Aby sa predišlo vzniku falošných záverov, údajný pacient musí prísť do laboratória o niečo skôr ako krv. Trvá 15-20 minút, kým človek chytí dych, upokojí sa. Adrenalín, ktorý je prítomný v krvi po rýchlej chôdzi, môže ovplyvniť výsledok vyšetrenia.

Ak pacient uvedený na analýzu vezme nejaké lieky, mal by o tom informovať lekára. Je možné, že niektoré z nich budú musieť byť na určitý čas odmietnuté (ak je to možné).

Výsledok analýzy PCR na hepatitídu C

Dekódovanie výsledkov laboratórneho lekára laboratória, ktoré vykonalo analýzu. Dekódovanie je určenie odchýlky výsledku získaného z normy. Rýchlosť ukazovateľov stanovuje priamo výrobca testovacieho systému, ktorý laboratórium používa na diagnostiku. Preto nie je prekvapujúce, že v niektorých laboratóriách je vírusová záťaž stanovená v IU / ml a v iných v kópiách / ml.

Po získaní záveru je potrebné, aby sme ho mohli správne interpretovať. Ošetrenie výsledkov štúdie by mal vykonať ošetrujúci lekár pacienta s hepatitídou C. Lekár môže po objektívnom, inštrumentálnom a laboratórnom vyšetrení pacienta získať dostatočné množstvo údajov na správnu interpretáciu získaných výsledkov PCR.

Hodnotenie kvalitatívnej analýzy spravidla nespôsobuje ťažkosti ani u pacientov. Výsledkom môže byť iba jeden: "detekovaný" alebo "nezistený". V tomto prípade je druhá z nich normou.

Ukazovatele kvantitatívnej analýzy je zložitejšie interpretovať. Ukazuje stupeň vírusovej záťaže pacienta. Ani medzi hepatológmi neexistuje konsenzus o tom, ako liečiť zistenú virémiu. Väčšina lekárov má sklon veriť, že by sa malo zvážiť vysoké zaťaženie viac ako 8 × 10 * 5 IU / ml. Zaťaženie viac ako 1 x 10 x 7 IU / ml sa považuje za veľmi vysoké, zatiaľ čo nízke zaťaženie je menšie ako 4 × 10 x 5 IU / ml.

Stupeň vírusovej záťaže indikuje virulenciu (agresivitu) vírusu: čím väčšie je jeho množstvo v krvi, tým rýchlejšie sa môžu vyvinúť komplikácie pečene. Vysoká koncentrácia vírusu v krvi tehotnej ženy zvyšuje pravdepodobnosť jeho preniknutia cez hemato-placentárnu bariéru k plodu. Virémia tiež ovplyvňuje účinnosť liečby: pri nízkych počtoch je účinnosť liečby vyššia ako u vysokých.

Aby sme boli presvedčení o presnosti analýzy PCR pre hepatitídu C, je potrebné uprednostniť len tie laboratóriá, ktoré sú dobre overené. Cenová politika by v tomto prípade nemala zohrávať primárnu úlohu.

Použitie PCR diagnostiky

Polymerázová reťazová reakcia (PCR) v molekulárnej biológii je experimentálna metóda na detekciu vírusov. Umožňuje významne zvýšiť koncentráciu určitých fragmentov nukleových kyselín (DNA) vo vzorkách biologického materiálu, čo umožňuje ich určenie a rozpoznanie.

Analýza sa uskutočňuje nasledujúcim spôsobom. Genetický materiál (vzorka krvi), ktorý môže potenciálne obsahovať požadovaný gén, sa zavedie do skúmavky. Tam sú tiež umiestnené priméry - chemicky syntetizované segmenty malej dĺžky požadovaného génu.

DNA alebo RNA polymeráza je tiež pridaná do cievy, je schopná usporiadať reťazec nukleovej kyseliny, ktorý je úplne identický s originálom. Výsledná kompozícia sa vstrekne a súbor štyroch voľných nukleotidov - špeciálny stavebný materiál pre RNA alebo DNA, z ktorých jeden obsahuje rádioaktívne častice fosforu.

Výsledná zmes sa zahreje na 95 až 96 ° C, čo je dôvod, prečo sú tkané dve skrutkovnice DNA, ktoré sú normálne prepletené. Potom sa liečivo ochladí, v tomto čase sa priméry samotné pripoja na požadovanú oblasť vírusového genómu, čím sa zabráni tomu, aby RNA (alebo DNA) znovu vytvorila dvojitú helixu.

V procese ochladzovania polymeráza hľadá voľný nukleotidový reťazec. Na fungovanie tohto enzýmu je potrebný jeden reťazec nukleotidov. Keďže polymeráza prechádza pozdĺž reťazca DNA (ako prsteň na lane), nie je schopná pracovať na dvojitej špirále.

Potom sa uskutoční opakovaný cyklus zahrievania, v dôsledku čoho sa oddelia reťazce nukleotidov. V každom z týchto cyklov PCR sa množstvo požadovaného génu hepatitídy vo vzorke exponenciálne zvyšuje a zvyšok genetického materiálu sa produkuje (rastie) lineárne.

Po purifikácii roztoku z nukleotidových zvyškov a separácii DNA reťazcami pomocou parametra molekulovej hmotnosti pomocou elektroforézy je možné ľahko určiť, či je v skúmanej vzorke požadovaný gén alebo nie.

Výhody PCR

Laboratórne testovanie pomocou PCR umožňuje získať viac informácií ako prítomnosť vírusovej RNA. Stanovením parametra úrovne rádioaktívneho žiarenia je možné identifikovať, koľko genetického materiálu bol pôvodne obsiahnutý v skúmanej vzorke. V prípade hepatitídy určte ukazovateľ úrovne vírusovej záťaže.

Ďalšou výhodou tejto metódy je veľmi vysoký stupeň citlivosti CR reakcie. Je oveľa vyššia ako klasické metódy detekcie vírusov. V ideálnom prípade, na identifikáciu požadovaného génu, pre PCR postačuje len jeden vírus vo vzorke.

Okrem toho je PCR úplne špecifická. Jeho priméry sú navrhnuté tak, aby plne zodpovedali jedinečným oblastiam požadovaných génov, ktoré nemajú žiadnu inú sekvenciu. Rovnako ako odtlačky prstov sú jedinečné, každý gén má jedinečné sekvencie nukleotidov.

Kvalitatívna analýza PCR

Kvalitatívna analýza odhaľuje iba prítomnosť vírusu v krvi. Tento test by sa mal vykonať pre všetkých pacientov, u ktorých sa v krvi našli protilátky proti hepatitíde C. Výsledkom môže byť iba jedna z dvoch hodnôt: „detekovaná“ alebo „nezistená“. U zdravého človeka by mala byť norma (referenčná hodnota) „nezistená“.

Existuje špeciálna interpretácia týchto výsledkov kvalitatívneho výskumu:

• Výsledok je „zistený“. To znamená, že v analyzovanej vzorke biologického materiálu bol nájdený fragment RNA, ktorý je špecifický pre vírus hepatitídy C. V dôsledku toho je pacient infikovaný vírusom hepatitídy C. Ak je výsledok vysoko kvalitnej PCR "detegovaný", znamená to, že vírus sa množí. a v tomto čase infikuje nové pečeňové bunky v tele.
• Výsledok je "nezistený." Takýto verdikt ukazuje, že v analyzovanej vzorke získaného biologického materiálu v tomto laboratóriu sa nenašiel fragment RNA, ktorý je špecifický pre vírus hepatitídy C. Alternatívne, koncentrácia RNA infekcie patogénom v tejto vzorke bola pod hranicou citlivosti testu.

V akútnej fáze RNA vírusu hepatitídy C je možné takéto kvalitatívne štúdie PCR metódou zistiť už po 1-2 týždňoch bezprostredne po infekcii tela, to znamená dlho pred objavením sa protilátok proti samotnej hepatitíde.

Nespoľahlivé výsledky testov tejto štúdie je možné získať na:

• kontaminovaný biomateriál;
• prítomnosť heparínu v krvi pacienta;
• prítomnosť vo vzorke chemických alebo proteínových látok (inhibítorov), ktoré ovplyvňujú rôzne zložky PCR.

Na vykonanie kvalitatívnej analýzy PCR sa nevyžaduje žiadna špeciálna príprava pacienta na štúdiu. Použitým materiálom je venózna krv.

Vyhodnotenie výsledkov

Vysoko kvalitné PCR testy majú určitý stupeň citlivosti av závislosti od presnosti výskumu a úrovne vybavenia v laboratóriu sa môžu pohybovať od 10 do 500 IU / ml.

To znamená, že ak je vírus vo vzorke krvi prítomný vo veľmi nízkej koncentrácii (nižšej ako je prahová hodnota citlivosti tohto laboratória), výsledok pre chorého pacienta môže byť „nezistený“. Z tohto dôvodu je pri uskutočňovaní kvalitatívnej analýzy PCR s nízkou hladinou virémie (nízka koncentrácia vírusu), napríklad u pacientov podstupujúcich antivírusovú terapiu, veľmi dôležité poznať prah citlivosti tohto diagnostického systému.

Varianty diagnostických systémov

Na kontrolu virologickej odpovede sa odporúča použiť diagnostické systémy s prahom citlivosti najmenej 50 IU / ml pri vykonávaní antivírusovej liečby. Tieto kritériá sú splnené napríklad pomocou analyzátorov Cobas Ampicolor HCV-Test (s presnosťou na 50 IU / ml), ako aj RealBest HCV RNA (s citlivosťou 15 IU / ml).

Podľa odporúčaní Svetovej zdravotníckej organizácie (WHO), na stanovenie definitívnej diagnózy hepatitídy C, je potrebné založiť iba na základe trojnásobnej detekcie RNA vírusu C vo vzorkách pacientovho séra v neprítomnosti iných odrôd markerov hepatitídy.

Okrem metód PCR sa na detekciu HCV RNA u pacientov používa aj TMA test (metóda transkripčnej amplifikácie). Má najlepší prah citlivosti (5 - 10 IU / ml), ale v našej krajine takáto testovacia metóda ešte nie je veľmi bežná.

Rozsah detekovaných vírusových modifikácií

Takéto kvalitatívne stanovenie prítomnosti RNA vírusu hepatitídy C v sére umožňuje stanoviť niekoľko genotypov tohto vírusu. V súčasnosti veda pozná viac ako šesť genotypov tohto vírusu, ako aj približne 10 podtypov tohto ochorenia.

V našej krajine, bežné vírusy 1, 2, 3 genotypy. Laboratóriá môžu detegovať nasledujúce genotypy: la a lb, 2a, 2b a 2c, ako aj 3, 4, 5a a 6, bez ohľadu na subtypy. Pre všetky modifikácie vírusu je detekčná špecificita 100%.

Kvantitatívna analýza PCR

Pomocou kvantitatívneho testu PCR sa stanoví úroveň koncentrácie vírusu hepatitídy vo vzorkách krvi (vírusová záťaž). Tento test na virémiu (koncentrácia vírusu) vám umožňuje určiť počet jednotiek určitého genetického materiálu (samotnej vírusovej RNA), ktorý sa deteguje v určitom množstve. V tomto prípade stanovte jeho koncentráciu v 1 ml, čo zodpovedá 1 cu. cm.

Kvantitatívne parametre analýzy sú vyjadrené na obrázkoch, na tento účel sa ako jednotky merania používajú medzinárodné jednotky (IU) na mililiter (ml), označované ako IU / ml. V niektorých laboratóriách je teraz možné stanoviť množstvo vírusu v iných jednotkách: počet kópií na ml je označený ako kópie / ml.

• V prípade hepatitídy C sa takáto kvantitatívna analýza PCR vykoná bezprostredne pred začiatkom liečby. Potom 1., 4., 12. a 24. týždeň. Hodnotenie v 12. týždni je indikatívne, umožňuje určiť účinnosť terapie.
• Príprava na analýzu. Na vykonanie kvantitatívnej analýzy PCR sa nevyžaduje špeciálna príprava pacienta na štúdiu. Pol hodiny pred odberom vzoriek by nemali fajčiť. Ako laboratórny materiál sa používa venózna krv.

Vyhodnotenie výsledkov

Pre rôzne laboratórne testovacie systémy existujú pre tento ukazovateľ rôzne prevodné faktory v IU / ml. V priemere preberajú parameter konverzie, v ktorom 4 kópie / ml = 1 IU / ml. To znamená napríklad, ak laboratórium poskytne výsledok PCR analýzy 2,4 x 106 kópií / ml, potom by sa tento parameter mal rozdeliť na 4 a dostaneme 6 x 105 IU / ml.

Zaťaženie 800 000 IU / ml sa považuje za vysoké, čo zhruba zodpovedá 3 000 000 kópií / ml. Nízka virémia, podľa niektorých autorov, zodpovedá parametrom kvantitatívnej PCR pod 400 000 IU / ml.

Výsledkom kvantitatívneho testu je, že konečné výsledky môžu byť dodané nie vo forme digitálnej hodnoty, ale: „pod meracím rozsahom“ alebo „nezistené“.

• Hodnotenie: "pod meracím rozsahom." To naznačuje, že kvantitatívny test nedokázal detekovať vírusovú RNA hepatitídy C, ale samotný vírus je v tele prítomný vo veľmi nízkych koncentráciách. Dôkazom toho je dodatočná skúška kvality, ktorá potvrdzuje prítomnosť vírusu.
• Hodnotenie: nezistené. Tento výsledok ukazuje, že kvantitatívny test sa nenachádza vo vzorke RNA vírusu.

Parameter vírusovej záťaže v prvom rade určuje stupeň infekčnosti ochorenia, úroveň "infekčnosti" pacienta. Čím vyššia je koncentrácia vírusu pacienta, tým väčšia je pravdepodobnosť jeho prenosu na iných ľudí. Napríklad počas pohlavného styku s chorou osobou alebo vertikálne. Tento kvantitatívny ukazovateľ tiež pomáha určiť účinnosť liečby pacienta.

Vykonanie kvantitatívnej analýzy CCP je dôležité pre antivírusovú terapiu, ktorá hodnotí jej úspešnosť a plánuje trvanie priebehu. Teda s rýchlou reakciou tela na liečbu a nízkym stupňom virémie môže byť trvanie liečby znížené.

Ak sa kvantitatívny parameter PCR pomaly znižuje, antivírusová liečba by sa mala rozšíriť alebo upraviť. Ak je úroveň vírusovej záťaže nízka, potom je to priaznivý faktor v terapii, ak je zvýšená, potom je použitá metóda neúčinná a lieky alebo spôsoby ich použitia by sa mali zmeniť.

Kvalitatívna a kvantitatívna analýza PCR pre hepatitídu C: negatívny, pozitívny, transkript

Hepatitída C je vírusové ochorenie pečene spôsobené flavivírusom HCV (z anglického vírusu hepatitídy C), ktorého štruktúra obsahuje molekulu ribonukleovej kyseliny (RNA). RNA nesie genetický kód vírusu. Jeho prítomnosť umožňuje analýzu PCR na hepatitídu C.

Nebezpečenstvo HCV pre človeka spočíva v tom, že takzvané sérologické okno (čas medzi infekciou a výskytom reakcie imunitného systému) môže byť dosť dlhé - od niekoľkých týždňov do šiestich mesiacov.

Nezistí infekciu a začne liečbu včas.

V závislosti od individuálnych charakteristík organizmu sa nosič HCV môže prejaviť v akútnej forme, ako aj ako chronické ochorenie, ktoré bude vyžadovať dlhodobú a nákladnú liečbu. Pri detekcii protilátok proti HCV sa vykonáva séria laboratórnych testov, vrátane PCR na hepatitídu C. Tento test sa vykonáva všetkým ľuďom, u ktorých sa zistili krvné protilátky proti HCV.

Čo je to analýza PCR?

Laboratórna analýza PCR pre hepatitídu C - štúdia biologického materiálu na identifikáciu prítomnosti flavavírusu.

Polymerázová reťazová reakcia (ako skratka znamená) ukazuje kvantitatívnu hodnotu vírusového poškodenia organizmu, jeho kvalitatívne charakteristiky, ako aj genotyp vírusu obsahujúceho RNA.

Na ich základe, ako aj na základe dodatočných analýz, sa určuje spôsob a trvanie terapie, ako aj epidemiologický faktor (stupeň rizika prenosu na iného dopravcu).

Čo je analýza RNA hepatitídy C?

PCR hepatitídy C sa tiež nazýva analýza RNA (HCV RNA), pretože Flavavírus obsahuje RNA časticu s veľkosťou viriónu 30-60 nm. Jednou z vlastností tohto mikroorganizmu je vysoký sklon k mutáciám.

Každý z poddruhov (genotypov) vírusu má odlišnú rezistenciu, ktorá spôsobuje rôzne spôsoby liečby a povahu ďalšej prognózy pre pacienta.

Biologický materiál (venózna krv) sa podáva nalačno a spravidla sa testuje metódou Real-Time PCR (vysoko citlivá diagnostika v reálnom čase s nižším detekčným limitom 15 IU / ml s použitím uzavretých automatizovaných systémov).

Existujú aj iné testy, napríklad COBAS AMPLICOR s citlivosťou 50-100 IU / ml. Pre každý laboratórny test je dôležitý prah citlivosti, t. schopnosť činidla zistiť minimálnu koncentráciu vírusu v biologickom materiáli.

Typy analýzy hepatitídy C pomocou PCR

PCR hepatitídy C obsahuje tri dôležité zložky:

• kvalitatívna analýza;
• kvantitatívna analýza;
• genotypu.

Tieto testy môžu určiť povahu virémie, ako aj genetické vlastnosti patogénu. V závislosti od citlivosti diagnostického systému sa štúdia vykonáva raz a niekedy sa vykoná druhý test s citlivejším činidlom na potvrdenie alebo zdokonalenie výsledkov.

Vysoko kvalitná PCR hepatitída C

Kvalitatívna analýza PCR hepatitídy C je ďalším bežným názvom pre analýzu polymerázovej reťazovej reakcie. Štandardná citlivosť testu, ktorá umožňuje detekciu prítomnosti vírusových lézií, je v rozsahu 10-500 IU / ml.

Negatívna PCR analýza hepatitídy C ukazuje, že koncentrácia vírusu v krvi pacienta je pod prahom citlivosti diagnostického systému.

Ak vysokokvalitná PCR dala odpoveď "nedetekovaná", potom pre ďalšiu liečbu je dôležité zistiť prah citlivosti činidla.

Proteínové frakcie do flavavírusu sa objavujú oveľa neskôr.

Kvantitatívna PCR hepatitídy C

Kvantitatívna PCR PCR je indikátorom vírusovej záťaže, ktorá odráža hladinu koncentrácie flavavírusovej RNA v tele. Toto je indikátor ukazujúci, koľko fragmentov vírusovej RNA je obsiahnutých na kubický centimeter krvi. Výsledky PCR RNA hepatitídy C v kvantitatívnom teste v konvenčnom systéme sú uvedené v medzinárodných jednotkách na mililiter (IU / ml) a môžu byť zaznamenané rôznymi spôsobmi, napríklad 1,7 milióna alebo 1,700 000 IU / ml.

Kvantitatívna PCR diagnostika hepatitídy C sa predpisuje pacientom pred začiatkom antivírusovej liečby a v 12. týždni liečby, aby sa vyhodnotili výsledky zvoleného spôsobu liečby HCV. Vírusová záťaž umožňuje určiť tri dôležité ukazovatele ochorenia:

• infekčnosť, t.j. stupeň rizika prenosu vírusu z jedného nosiča na druhého (čím vyššia je koncentrácia flavavírusovej RNA, tým vyššia je pravdepodobnosť infikovania inej osoby, napríklad prostredníctvom sexuálneho kontaktu);
• spôsob a účinnosť liečby;
• trvanie a prognóza antivírusovej terapie (čím vyššia je vírusová záťaž, tým dlhšie trvá liečba).

Kvantitatívna PCR diagnostika hepatitídy C závisí od typu laboratórneho testu a prahu jeho citlivosti. Spodná hranica normy sa považuje za ukazovateľ do 600 000 IU / ml, priemerná hodnota je do 600 000 - 700 000 IU / ml. Výsledky 800 000 IU / ml a vyššie sú považované za vysoké hladiny vírusu obsahujúceho RNA.

genotypu

Vzhľadom na vysokú mutačnú aktivitu HCV v prírode je pri testovaní dôležité identifikovať, ktorý vírusový genotyp je v krvi pacienta. Celkovo bolo na planéte zaznamenaných 11 genotypov vírusu hepatitídy C, ktoré zahŕňajú mnoho poddruhov (podtypov). Na území Ruskej federácie bolo rozdelených 1,2 a 3.

Hepatitída C PCR RNA spolu s genotypizáciou je veľmi dôležitou zložkou analýzy umožňuje lekárovi určiť rezistenciu (rezistenciu) vírusu, vybrať vhodné lieky a predpísať priebeh liečby.

Genotypizácia tiež umožňuje nepriame stanovenie stavu pečene. Napríklad 3 genotyp HCV je často sprevádzaný steatózou, v ktorej sa tuk akumuluje v bunkách orgánu.

Krvný test na PCR na hepatitídu C by mal vytvoriť údaj, ktorý určuje genotyp. Laboratórne odpovede môžu povedať „nie sú napísané“ - to znamená, že vírus je v ľudskej krvi, ktorá nie je detekovaná testovacím systémom. To môže naznačovať, že genotyp nie je typický pre danú zemepisnú oblasť. V tomto prípade by ste mali zopakovať analýzu s vyššou citlivosťou diagnostického systému.

Dekódovanie PCR analýzy pre hepatitídu C

Test kvantitatívnej dešifrovania PCR hepatitídy C môže byť založený na vyššie uvedených údajoch. Pri získavaní výsledkov laboratórnych testov sa zvyčajne zapisujú tieto údaje:

• „Nájdené“ / „nenájdené“ (vysoko kvalitná PCR pre hepatitídu C);
• počet frakcií obsahujúcich RNA, napríklad 831,680 ME / ml (kvantitatívna analýza PCR);
• číslo, ktoré určuje genotyp HCV, napríklad - 1, 2, 3, 4;
• Názov testu je najčastejšie v reálnom čase.

Najdôležitejšou vecou pri dešifrovaní PCR analýzy hepatitídy C je druhá položka, ktorá ukazuje vírusovú záťaž, ktorá určuje prognózu, spôsob a trvanie liečby.

Ak je test PCR na hepatitídu C negatívny a test ELISA je pozitívny - čo to znamená?

Na dešifrovanie laboratórnych testov je dôležité kontaktovať hepatológa alebo špecialistu na infekčné ochorenia, ktorý vysvetlí informácie získané v súlade s typom diagnostického systému a prahom citlivosti. V lekárskej praxi existuje mnoho údajov o krvných testoch, ktoré môžu zavádzať osobu bez lekárskeho vzdelania.

Ak je napríklad test na PCR hepatitídy C negatívny a test ELISA je pozitívny, môže to znamenať, že v súčasnosti nie je v krvi pacienta žiadny HCV, ale predtým trpel akútnou formou hepatitídy C. v krvi sú protilátky, ktoré boli vyrobené po invázii vírusu v minulosti. V modernej lekárskej praxi sa však analýza ELISA považuje za nedostatočne spoľahlivú a často dáva netypické výsledky, takže ju lekári používajú ako primárny skríning. Pri diagnostikovaní ochorenia sa špecialisti riadia presne PCR testami.

Užitočné video

Nasledujúce video rozpráva veľmi podrobným a zaujímavým spôsobom podstatu metódy PCR, ako sa analýza vykonáva:

záver

Na analýzu PCR hepatitídy C sa zvyčajne berie venózna krv. Najčastejšie je dvojitý príjem biologického materiálu - pre test ELISA a priamo pre test PCR. Pre správne výsledky testov sa vyžaduje dodržiavanie základných pravidiel pre laboratórny zber biologického materiálu:

• krv na analýzu sa podáva v prvej polovici dňa nalačno;
• medzi odberom jedla a krvi by malo trvať najmenej 8 hodín;
• Alkohol a vyprážané potraviny by mali byť tiež vylúčené pred vykonaním testu.
• počas dňa pred darovaním krvi je potrebné zabrániť vysokej fyzickej námahe.

Výsledky krvných testov sú zvyčajne pripravené nasledujúci deň.